ГОСТ 13496.22-90 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метионина

ГОСТ 13496.22-90
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
К О РМ А , К О М Б И К О РМ А ,
К О М Б И К О Р М О В О Е С Ы РЬЕ
МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЦИСТИНА И МЕТИОНИНА
Издание официальное
М осква
С тан д ар тин ф ор м
2011
áîëåðî

УДК 636.085.3:006.354 Группа С 19
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
КОРМА, КОМБИКОРМА, КОМБИКОРМОВОЕ СЫРЬЕ
Метод определения цистина и метионина
Fodder, mixed fodder and mixed fodder raw materials.
Method for determination of cistinum and metioninum
MKC 65.120
ОКСТУ 9209
ГОСТ
13496.22-90
Дата введения 01.01.92
Настоящий стандарт распространяется на все виды кормов, комбикормов и комбикормовое
сырье и устанавливает метод определения цистина и метионина.
Метод основан на окислении цистина и метионина смесью перекиси водорода с муравьиной
кислотой до цистеиновой кислоты и метионинсульфона и последующем их разделении на ионооб­
менной хроматографической колонке после гидролиза соляной кислотой концентрации с (НС1) =
= 6 моль/дм3. Интенсивность окрашенного комплекса при реакции с нингидриновым реактивом
пропорциональна содержанию аминокислоты в растворе.
Стандарт применяют в научно-исследовательских учреждениях, лабораториях агрохимической
службы, республиканских и зональных лабораториях комбикормовой промышленности.
1. ОТБОР ПРОБ
Отбор проб - по ГОСТ 13496.0, ГОСТ 13586.3, ГОСТ 13979.0, ГОСТ 17681, ГОСТ 27262.
2. АППАРАТУРА
Измельчитель проб растений ИПР-2 или соломорезка марки ИСР-1.
Сушилка проб кормов СК-2 или шкаф сушильный лабораторный с погрешностью поддержа­
ния температуры не более 5 °С.
Шкаф сушильный типа СЭШ-ЗМ или аналогичный с рабочей температурой 110 °С, макси­
мальным перепадом температуры 2 °С и периодическим колебанием температур в рабочей зоне не
более 0,5 °С.
Мельница лабораторная МРП-2.
Сито с круглыми отверстиями диаметром 1 мм.
Весы лабораторные 2-го и 3-го классов точности с пределом взвешивания 200 и 500 г по
ГОСТ 24104*.
Автоклав по ГОСТ 14106.
Термоблок многопозиционный для гидролиза кормов ТМ-1.
Автоанализатор аминокислот.
Устройство для выпаривания гидролизатов УВГ-1 или баня водяная.
рН-метр.
Дозатор стеклянный вместимостью 10 см3.
Ампулы стеклянные с перетяжкой вместимостью 20 см3 по ГОСТ 21400.
Колбы мерные вместимостью 50, 100, 1000 см3 по ГОСТ 1770.
Пробирки стеклянные вместимостью 20 см3 по ГОСТ 1770.
* С 1 июля 2002 г. введен в действие ГОСТ 24104—2001. На территории Российской Федерации действует
ГОСТ Р 53228-2008.
Издание официальное
180
Перепечатка воспрещена
© Издательство стандартов, 1990
© СТАБДАРТИНФОРМ, 2011

ГОСТ 1 3 4 96.22-90 С. 2
Пипетки градуированные вместимостью 1, 2, 5, 10 см3 по ГОСТ 29227.
Воронки стеклянные диаметром 2—3 см по ГОСТ 25336.
Чашки фарфоровые по ГОСТ 9147.
Бюксы стеклянные диаметром не менее 5 см по ГОСТ 25336.
Палочки стеклянные оплавленные.
Набор реактивов к автоанализатору.
Стандартные растворы аминокислот.
Кислота соляная концентрированная по ГОСТ 3118, х. ч.
Раствор соляной кислоты концентрации с (НС1) = 6 моль/дм3; готовят смешиванием равных
объемов концентрированной соляной кислоты и дистиллированной воды.
Натрий лимоннокислый трехзамещенный по ГОСТ 22280, х. ч. или ч. д. а.
Фенол.
Натрия гидроокись по ГОСТ 4328, х. ч., раствор с массовой долей 50 %.
Кислота муравьиная по ГОСТ 5848, ч. д. а.
Водорода перекись по ГОСТ 10929.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709 двойного перегона.
Фильтры беззольные с синей полосой по ГОСТ 12026.
Допускается использовать аппаратуру, мерную посуду и другие средства измерений, имеющие
такие же или лучшие метрологические характеристики.
3. ПОДГОТОВКА К ИСПЫТАНИЮ
3.1. Подготовка проб
Среднюю пробу сена, сенажа, зеленой массы измельчают на отрезки длиной 1—3 см. Корнеп­
лоды разрезают на пластинки (ломтики) толщиной до 0,8 см. Методом квартования выделяют часть
средней пробы, масса которой после высушивания должна быть не менее 100 г. Высушивание проб
проводят в сушильном шкафу при температуре 60—65 °С до воздушно-сухого состояния. После вы­
сушивания пробу размалывают на мельнице и просеивают через сито. Остаток на сите дополнитель­
но измельчают, добавляют к просеянной части и тщательно перемешивают.
Средние пробы комбикормов, зерна, жмыхов, шротов, гранул травяной муки или витаминной
муки из древесной зелени размалывают без предварительного подсушивания и просеивают через
сито. Корма с содержанием жира более 10 % предварительно обезжиривают.
Подготовленные пробы хранят в стеклянной или пластмассовой банке с крышкой в сухом тем­
ном месте не более двух лет.
3.2. Приготовление окислительной смеси
Окислительную смесь готовят смешиванием перекиси водорода и муравьиной кислоты в соот­
ношении 1:9; готовят в день проведения испытания.
3.3. Приготовление буферного раствора (2,20±0,02) ед. pH
19,6 г лимоннокислого трехзамещенного натрия растворяют в 200—300 см3 дистиллированной
воды, приливают 16,6 см3 концентрированной соляной кислоты, 1 см3 фенола и доводят объем до
1 дм3 в мерной колбе дистиллированной водой. Концентрацию водородных ионов контролируют на
pH-метре и при необходимости корректируют раствором гидроокиси натрия с массовой долей 50 %
или концентрированной соляной кислотой.
3.4. Приготовление стандартного раствора аминокислот
Готовят из основного раствора, содержащего 187 мг цистеиновой кислоты и 181 мг метионин-
сульфона в 100 см3 раствора соляной кислоты концентрации с (НС1) = 0,1 моль/дм3.
Стандартный раствор аминокислот готовят разведением 25 см3 основного раствора в 100 см3
раствора соляной кислоты концентрации с (НС1) = 0,1 моль/дм3. 1 см3 такого раствора содержит
0,47 мг цистеиновой кислоты и 0,45 кг метионинсульфона, что соответствует 2,5 мкмоль каждой
кислоты в стандартном растворе, прилагаемом к автоанализаторам. Стандартный раствор хранят в
герметично закрытых флаконах в холодильнике в течение нескольких лет.
Рабочий раствор аминокислот готовят разведением стандартного раствора аминокислот в бу­
фере 2,20 ед. pH до концентрации, рекомендуемой для конкретного типа аминокислотного анализа­
тора.
181

С. 3 ГОСТ 1 3 4 96.22-90
4. ПРОВЕДЕНИЕ ИСПЫТАНИЯ
Навеску воздушно-сухого корма массой (100,0+0,1) мг помещают в чашку устройства для вы­
паривания гидролизатов УВГ-1 (или фарфоровую чашку при выпаривании на водяной бане), при­
ливают 5 см3 свежеприготовленной окислительной смеси и выпаривают при постоянном помеши­
вании при температуре 60 °С. Сухой остаток количественно переносят в ампулу термоблока ТМ-1
или в пробирку с перетяжкой, используя 10 см3 раствора соляной кислоты концентрации с (НС1) =
= 6 моль/дм3. Ампулу термоблока герметично закрывают тефлоновой крышкой и устанавливают в
термоблок для гидролизата при температуре 110 °С. На блоке управления включают тумблер «Пере­
мешивание» и устанавливают время гидролиза 4 ч.
При гидролизе в термостате ампулу запаивают в пламени газовой горелки в месте перетяжки и
помещают в предварительно нагретый до температуры 110 °С сушильный шкаф на 16 ч.
При гидролизе в автоклаве содержимое количественно переносят в пробирки вместимостью
20 см3, закрывают стеклянными колпачками или воронками для предотвращения разбрызгивания
кислоты во время гидролиза и устанавливают в автоклав. Гидролиз проводят при температуре 137 °С
и давлении 0,25 МПа в течение 3 ч.
После завершения гидролиза гидролизаты охлаждают до комнатной температуры, перемеши­
вают и содержимое фильтруют через беззольный фильтр (первую порцию фильтрата для анализа не
используют). 1—2 см3 фильтрата выпаривают досуха на УВГ-1 или водяной бане и осадок растворя­
ют в 10 см3 буферного раствора 2,20 ед. pH. Раствор гидролизата хранят в течение месяца в холо­
дильнике в герметично закрытых пробирках.
Испытуемый гидролизат пробы вводят автоматически или при помощи шприца в верхнюю
часть колонки анализатора аминокислот. Для идентификации аминокислот и их количественного
определения на колонку наносят стандартный раствор аминокислот. Порядок работы на аминоана-
лизаторах регламентируется прилагаемой инструкцией.
5. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ
Содержание аминокислот рассчитывают по соотношению площадей пиков на хроматограмме
соответствующих кислот в стандартном растворе и гидролизатах испытуемых проб.
5.1. Массу аминокислоты (X) в граммах на 1 кг воздушно-сухого вещества корма вычисляют
по формуле
с -5 1! ■ V ■ 1000
X . —
----------------,
$ 2 - т
где с — концентрация стандартного рабочего раствора, мг/см3;
Si — интегрируемая величина площади пика аминокислоты испытуемой пробы;
V— объем гидролизата, см3;
Sj — интегрируемая величина площади пика аминокислоты стандартного рабочего раствора;
т — масса навески пробы, мг.
Полученный результат корректируют с учетом разведения гидролизата и потери массы навес­
ки корма после обезжиривания.
Для пересчета цистеиновой кислоты и метионинсульфона в цистин и метионин используют
переводные коэффициенты 0,710 и 0,023 соответственно.
За окончательный результат испытания принимают среднеарифметическое результатов двух
параллельных определений. Результаты вычисляют до третьего десятичного знака и округляют до
второго десятичного знака. Допускаемые расхождения между результатами двух параллельных
определений (ДЕ) при доверительной вероятности Р = 0,95 не должны превышать значений:
для цистеина ДЕ = 0,132 + 0,058 X;
для метионина Дх = 0,06 + 0,088 X,
где X — среднеарифметическое результатов двух параллельных определений.
Допускается проведение анализа без параллельных определений при наличии в партии испы­
туемых проб стандартных образцов (СО). В этом случае за результат испытания принимают резуль-
182

ГОСТ 134 9 6 .2 2 -9 0 С. 4
тат единичного определения, если разница между воспроизведенным и аттестованным значением
содержания аминокислоты находится в пределах погрешности анализа.
5.2. Массу аминокислоты (Хх) в граммах на 1 кг сухого вещества корма вычисляют по
формуле
* 1
1 -1 0 0
100 - w ’
где X— масса аминокислоты в испытуемой пробе воздушно-сухого корма, г/кг;
W— влажность испытуемой пробы, %.
ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ
1. РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН ВПНО «Союзсельхозхимия»
2. УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по
управлению качеством продукции и стандартам от 05.12.90 № 3052
3. ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
4. ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ
Обозначение НТД, на который дана ссылка Номер раздела
ГОСТ 1770-74 2
ГОСТ 3118-77 2
ГОСТ 4328-77 2
ГОСТ 5848-73 2
ГОСТ 6709-72 2
ГОСТ 9147-80 2
ГОСТ 10929-76 2
ГОСТ 12026-76 2
ГОСТ 13496.0-80 1
ГОСТ 13586.3-83 1
ГОСТ 13979.0-86 1
ГОСТ 17681-82 1
ГОСТ 14106-80 2
ГОСТ 21400-75 2
ГОСТ 22280-76 2
ГОСТ 24104-88 2
ГОСТ 25336-82 2
ГОСТ 27262-87 1
ГОСТ 29227-91 2
5. Ограничение срока действия снято по протоколу № 2—92 Межгосударственного совета по стан
дартизации, метрологии и сертификации (ИУС 2—93)
6. ПЕРЕИЗДАНИЕ. Март 2011 г.
183

СОДЕРЖАНИЕ
ГОСТ 13496.0—80 Комбикорма, сырье. Методы отбора п р о б
..........................................................................3
ГОСТ 13496.1—98 Комбикорма, комбикормовое сырье. Методы определения содержания натрия
и хлорида н а т р и я .................................................................................................................. 9
ГОСТ Р 52839—2007 Корма. Методы определения содержания сырой клетчатки с применением промежу­
точной фильтрации.............................................................................................................. 21
ГОСТ 13496.3—92 Комбикорма, комбикормовое сырье. Методы определения влаги ................................33
(ИСО 6496-83)
ГОСТ 13496.4—93 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Методы определения содержания азота
и сырого п ротеи н а..................................................................................................................39
ГОСТ 13496.5—70 Комбикорм. Метод определения споры ньи.......................................................................57
ГОСТ 13496.6—71 Комбикорм. Метод выделения микроскопических гри б ов..............................................64
ГОСТ Р 52337—2005 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Методы определения общей токсич­
ности ...........................................................................................................................................67
ГОСТ 13496.8—72 Комбикорма. Методы определения крупности размола и содержания неразмолотых
семян культурных и дикорастущих растений.......................................................................85
ГОСТ 13496.9—96 Комбикорма. Методы определения металломагнитной при м еси
...................................89
ГОСТ 13496.10—74 Комбикорм. Метод определения содержания спор головневых грибов
........................97
ГОСТ 13496.12—98 Комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения общей кислотности . . . 101
ГОСТ 13496.13—75 Комбикорма. Методы определения запаха, зараженности вредителями хлебных
за п а с о в ....................................................................................................................................107
ГОСТ 13496.15—97 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Методы определения содержания
сырого ж ира.............................................................................................................................111
ГОСТ 13496.17—95 Корма. Методы определения каротина
..............................................................................123
ГОСТ 13496.18—85 Комбикорма, комбикормовое сырье. Методы определения кислотного числа жира 131
ГОСТ 13496.19—93 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Методы определения содержания
нитратов и нитритов...............................................................................................................139
ГОСТ 13496.20—87 Комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения остаточных количеств
пестицидов.............................................................................................................................159
ГОСТ 13496.21—87 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Методы определения лизина и трипто­
фана ........................................................................................................................................167
ГОСТ 13496.22—90 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метио­
нина ........................................................................................................................................179
Сдано в набор 20.01.2011. Подписано в печать 04.04.2011. Формат 60x84Vs- Бумага офсетная. Гарнитура
КОМБИКОРМА
Часть 4
Корма. Комбикорма. Комбикормовое сырье. Методы анализа
БЗ 8-2010
Редактор М.И. Максимова
Технический редактор Н.С. Гришанова
Корректор М.В. Бучная
Компьютерная верстка В.И. Грищенко
в набор 20.01.2011. Подписано в печать 04.04.2011. Формат 60x84Vs- Бумага офсетная. Гар]
Таймс. Печать офсетная. Уел. печ. л. 21,39. Уч.-изд. л. 19,40. Тираж 350 экз. Зак. 280.
Изд. № 3970/2.
ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ», 123995 Москва, Гранатный пер., 4.
www.gostinfo.ni info@gostinfo.ru
Набрано во ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ» на ПЭВМ.
Отпечатано в Калужской типографии стандартов, 248021 Калуга, ул. Московская, 256.
ÃÎÑÒ 13496.22-90