ГОСТ 13496.6-2017 Комбикорма. Метод выделения микроскопических грибов

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ
(МГС)
INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION. METROLOGY AND CERTIFICATION
(ISC)
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ
СТАНДАРТ
ГОСТ
13496.6—
2017
КОМБИКОРМА
Метод выделения микроскопических грибов
Издание официальное
у . . - - ,
М 0 С Ж Ж Д
С т щ ц л 1 » ф о 1 м
202*
øóìîèçîëÿöèÿ îò óäàðíîãî øóìà

ГОСТ 13496.6—2017
П редисловие
Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандар­
тизации установлены ГОСТ 1.0 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения»
и ГОСТ 1.2 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила
и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления
и отмены»
Сведения о стандарте
1 РАЗРАБОТАН Акционерным обществом «Всероссийский научно-исследовательский институт
комбикормовой промышленности» (АО «ВНИИКП»)
2 ВНЕСЕН Межгосударственным техническим комитетом по стандартизации МТК 4 «Комбикор­
ма, белково-витаминные добавки, премиксы»
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации
(протокол от 14 июля 2017 г. N» 101-П)
За принятие проголосовали:
К р а ж о е н а и м е н о в а н и е с т р а н ы
п о М К ( И С О 3 1 6 6 ) 0 0 4 - 97
К о д с т р а н ы
n o М К (И С О 3 1 6 6 ) 0 0 4 - 97
С о к р а щ е н н о е н а и м е н о в а н и е
н а ц и о н а л ь н о г о о р г а н а п о с т а н д а р т и з а ц и и
Армения AM Минэкономики Республики Армения
Беларусь BY Госстандарт Республики Беларусь
Киргизия KG Кыргызстандарт
Россия RU Росстандарт
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 5 октября
2017 г. No 1356-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 13496.6— 2017 введен в действие в качестве на­
ционального стандарта Российской Федерации с 1 января 2019 г.
5 ВЗАМЕН ГОСТ 13496.6—71
6 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Август 2020 г.
Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изме­
нений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных
стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответству­
ющих национальных органов по стандартизации.
В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая ин­
формация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по
стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге «Межгосударственные стандарты»
© Стаидартинформ, оформление. 2017. 2020
В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или
частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального
издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию
и метрологии
II

ГОСТ 13496.6—2017
Содержание
1 Область применения........................................................................................................................................ 1
2 Нормативные ссылки........................................................................................................................................1
3 Термины и определения
............................................................................. 2
4 Требования безопасности............................................................................................................................... 2
5 Условия проведения испытаний.................................................................................................................... 2
6 Требования к квалификации оператора............................................ 2
7 Сущность метода
................................................................................. 3
8 Отбор проб........................................................................................................................................................ 3
9 Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы .......................................3
10 Подготовка к проведению испытания..........................................................................................................4
11 Проведение испытания................................................................................................................................. 4
12 Обработка результатов испытаний.............................................................................................................. 5
Библиография...................................................................................................................................................... 6

ГОСТ 13496.6— 2017
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
КОМБИКОРМА
Метод выделения микроскопических грибов
Mixed feeds. Method of detachment of fungi
Дата введения — 2019—01—01
1 О бласть прим енения
Настоящий стандарт распространяется на комбикорма, кормовые смеси, концентраты, кормовые
добавки и комбикормовое сырье (далее — корма) и устанавливает метод выделения микроскопических
грибов.
Настоящий стандарт не распространяется на сырье минерального происхождения.
2 Н орм ативны е ссы л ки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные
стандарты:
ГОСТ 12.1.004 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требо­
вания
ГОСТ 12.1.005 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требо­
вания к воздуху рабочей зоны
ГОСТ 12.1.007 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и
общие требования безопасности
ГОСТ 12.1.019 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требова­
ния и номенклатура видов защиты
ГОСТ 12.2.007.0 Система стандартов безопасности труда. Изделия электротехнические. Общие
требования безопасности
ГОСТ 12.4.009 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов.
Основные виды. Размещение и обслуживание
ГОСТ 12.4.021 Система стандартов безопасности труда. Системы вентиляционные. Общие тре­
бования
ГОСТ 1770 (ИСО 1042—83. ИСО 4788— 80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры,
мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 4148 Реактивы. Железо (II) сернокислое 7-водное. Технические условия
ГОСТ 4168 Реактивы. Натрий азотнокислый. Технические условия
ГОСТ 4198 Реактивы. Калий фосфорнокислый однозамещенный. Технические условия
ГОСТ 4234 Реактивы. Калий хлористый. Технические условия
ГОСТ 4523 Реактивы. Магний сернокислый 7-водный. Технические условия
ГОСТ 5556 Вата медицинская гигроскопическая. Технические условия
ГОСТ 6038 Реактивы. D-глюкоза. Технические условия
ГОСТ 6709 Вода дистиллированная. Технические условия
ГОСТ 9412 Марля медицинская. Общие технические условия
ГОСТ 13496.0 Комбикорма, комбикормовое сырье. Методы отбора проб
Издание официальное
1

ГОСТ 13496.6—2017
ГОСТ 17206 Агар микробиологический. Технические условия
ГОСТ 21669' Комбикорма. Термины и определения
ГОСТ 25336 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и
размеры
ГОСТ 29227 (ИСО 835-1—81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные.
Часть 1. Общие требования
ГОСТ OIML R 76-1 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтома­
тического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания
ГОСТ ISO 6498 Корма, комбикорма. Подготовка проб для испытаний
Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылоч­
ных стандартов и классификаторов на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандарти­
зации. метрологии и сертификации (www.easc.by) или по указателям национальных стандартов, издаваемым в
государствах, указанных в предисловии, или на официальных сайтах соответствующих национальных органов по
стандартизации. Если на документ дана недатированная ссылка, то следует использовать документ, действующий
на текущий момент, с учетом всех внесенных в него изменений. Если заменен ссылочный документ, на который
дана датированная ссылка, то следует использовать указанную версию этого документа. Если после принятия
настоящего стандарта в ссылочный документ, на который дана датированная ссылка, внесено изменение, затра­
гивающее положение, на которое дана ссылка, то это положение применяется без учета данного изменения. Если
ссылочный документ отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не
затрагивающей эту ссылку.
3 Т ерм ины и определения
В настоящем стандарте применены термины по ГОСТ 21669. ГОСТ ISO 6498.
4 Требования безопасности
4.1 При выполнении испытаний необходимо соблюдать требования безопасности при работе с
химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007. требования электробезопасности при работе с электро­
приборами по ГОСТ 12.1.019 и ГОСТ 12.2.007.0. требования, изложенные в технической документации
на используемые приборы.
4.2 Работа с химическими реактивами должна проводиться в вытяжном шкафу.
4.3 Помещение должно быть оснащено вентиляционными системами по ГОСТ 12.4.021. соот­
ветствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по
ГОСТ 12.4.009.
4.4 Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать допустимых значений по
ГОСТ 12.1.005.
5 Условия проведения испы таний
При подготовке и проведении испытаний должны быть соблюдены следующие условия:
- температура окружающей среды.............................................................................. от 15 ®С до 25 °С;
- относительная влажность воздуха................................................................................ не более 80 %;
- атмосферное давление..................................................................................................... (97 ± 10) кПа.
6 Требования к квалиф икации оператора
К выполнению испытаний и обработке их результатов допускают специалиста, имеющего опыт
работы в химической лаборатории, прошедшего инструктажи на рабочем месте, по электробезопас-
ности, по противопожарной безопасности, освоившего метод в процессе обучения и уложившегося в
нормативы оперативного контроля при выполнении испытаний.
* В Российской Федерации действует ГОСТ Р 51848—2001 «Продукция комбикормовая. Термины и
определения».
2

ГОСТ 13496.6—2017
7 С ущ ность метода
Сущность метода заключается в посеве разбавленных взвесой кормов на питательные среды
(метод разливки), инкубации посевов в термостате при определенных условиях и выявлении роста и
слороношения грибов, контаминирующих корма.
8 О тбор проб
Отбор проб кормов проводят по ГОСТ 13496.0 или в соответствии с нормативными документами
на исследуемые продукты.
9 Средства изм ерений, вспом огательны е устройства, материалы
и реактивы
Автоклав.
Шкаф сушильный.
Мельница лабораторная электрическая.
Весы лабораторные неавтоматического действия по ГОСТ OIML R 76-1 пределами допускаемой
абсолютной погрешности ±0.01 г.
Аппарат для встряхивания жидкостей (шюттель-аппарат).
Термостат с автоматическим терморегулятором.
Бокс для посевов.
Баня водяная.
Чашки ЧБН-1-100 (чашки Петри) по ГОСТ 25336.
Колбы Кн-1-500-34 ТХС по ГОСТ 25336.
Цилиндры мерные 1-500 (1000)-2 по ГОСТ 1770.
Пипетки градуированные 1-2-2-1 (2) по ГОСТ 29227.
Пробирки П1-16-150 ХС по ГОСТ 25336.
Воронки ВФ-3-100 ХС по ГОСТ 25336.
Ареометр Баллинга.
Горелка газовая или спиртовая.
Бумага универсальная индикаторная.
Вата медицинская гигроскопическая по ГОСТ 5556.
Марля медицинская по ГОСТ 9412.
Глюкоза по ГОСТ 6038.
Калий фосфорнокислый однозамещеиный по ГОСТ 4198.
Магний сернокислый по ГОСТ 4523.
Калий хлористый по ГОСТ 4234.
Натрий азотнокислый по ГОСТ 4168.
Железо сернокислое закисиое. по ГОСТ 4148.
Агар-агар по ГОСТ 17206.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Вода водопроводная.
Пенициллин (натриевая и калиевая соль бензилпенициллина).
Стрептомицин (стрептомицина сульфат).
Сусло пивное иеохмеленное с 12 %— 14 % сахаров.
Сито с размером стороны квадратной ячейки 1 мм.
Поверхностно-активное вещество ОП-7.
Поверхностно-активное вещество ОП-Ю.
Поверхностно-активное вещество Твин-80.
Примечание — Допускается применение средств измерений и вспомогательных устройств с аналогич­
ными метрологическими и техническими характеристиками, а также реактивов и материалов по качеству не хуже
указанных.
3

ГОСТ 13496.6—2017
10 П одготовка к п роведению испы тания
10.1 Подготовка проб
Подготовка проб — по ГОСТ ISO 6498 со следующим уточнением.
Размол пробы гранулированного корма производят на лабораторной мельнице до прохода через
сито с размером стороны квадратной ячейки 1 мм.
10.2 Для предупреждения загрязнения посевов применяемая посуда должна быть стерильной.
Стерилизацию чашек и пипеток, завернутых в бумагу, проводят в сушильном шкафу при температуре
140 °С— 160 °С в течение 2 ч. Все процессы, связанные с разливкой питательных сред, приготовлени­
ем разбавленной взвеси корма, посевом ее на питательную сроду, должны проводиться в стерильных
условиях — около пламени горелки в специальном боксе.
10.3 Состав и приготовление агаризированной среды Чапека
Состав агаризированной среды Чапека (агара Чапека):
- глюкоза — 30.0 г:
- натрий азотнокислый — 2.0 г,
- калий фосфорнокислый однозамещенный — 1.0 г;
- магний сернокислый — 0.5 г;
- калий хлористый — 0,5 г;
- железо сернокислое закисное — 0,01 г,
- вода дистиллированная — 1000 см3.
- агар-агар — 20—30 г.
Для приготовления агара Чапека берут 20—30 г агар-агара, заливают его 1000 см3 водопроводной
воды и вымачивают 2 ч при комнатной температуре. Воду сливают и измеряют ее объем для определе­
ния количества воды, впитавшейся агаром. Затем агар промывают два или три раза дистиллированной
водой.
Взвешивают остальные компоненты среды и растворяют их в таком объеме дистиллированной
воды, который составляла вода, слитая при вымачивании агара. К полученному раствору добавляют
отмытый агар-агар, после чего варят среду в автоклаве текучим паром в течение 1 ч.
Полученную среду фильтруют, разливают по колбам и стерилизуют в автоклаве при давлении
0.05 МПа в течение 20 мин. pH питательной среды должен быть от 6.0 до 6.8 ед. pH.
10.4 Приготовление суслового агара
Для приготовления суслового агара неохмеленное пивное сусло, содержащее (12— 14) % саха­
ров. фильтруют через тонкий слой ваты или 3— 4 слоя марли, разбавляют дистиллированной водой в
соотношении 1:2 или 1:3 по объему до 4°—7° по ареометру Баллинга. затем добавляют 2 % агар-агара.
Разливают по колбам и стерилизуют в автоклаве при температуре (110— 112) °С и давлении 0,05 МПа
в течение 20 мин.
Перед посевом сусловой агар расплавляют в водяной бане, затем, после охлаждения до
(45—50) °С. добавляют антибиотики для подавления сопутствующей бактериальной флоры — пени­
циллина 50000 ЕД и стрептомицина 100000 ЕД на 1 дм3 среды. После этого агар разливают в сте­
рильные чашки Петри и дают остыть до комнатной температуры на горизонтальной поверхности. Слой
агара должен быть но менее 0.5 см.
Допускается использовать готовые питательные среды.
11 П роведение и спы тани я
11.1 Приготовление разведений
11.1.1 В колбу с 100 см3 стерильного 0.1 %-ного раствора поверхностно-активного вещества
(ОП-7, ОП-Ю. Твин-80) в дистиллированной воде (далее — растворитель) помещают (10.00 ± 0,01) г
подготовленного по 10.1 корма. Полученную взвесь с соотношением корма и растворителя 1:10 (да­
лее — взвесь No 1) встряхивают в течение 15— 20 мин на шюттель-аппарате.
4

ГОСТ 13496.6—2017
11.1.2 Приготовление последующ их десятикратных разведений
Для получения взвеси Ns 2 (соотношение корма и растворителя 1:100) стерильной градуирован­
ной пипеткой берут 1 см3 взвеси Ns 1 и помещают в пробирку с 9 см3 растворителя.
Примечание — Конец пипетки следует отрезать для свободного прохождения частиц корма, после чего
пипетка должна быть откалибрована на 1 см3.
Из полученной взвеси № 2 готовят таким же образом взвесь № 3 (соотношение корма и раство­
рителя 1:1000) и. если необходимо, то из взвеси Ns 3 готовят взвесь № 4 (соотношение корма и раство­
рителя 1:10000).
Перед взятием очередной порции взвеси, как для получения дальнейшего разведения, так и для
посева, необходимо новой стерильной пипеткой сначала тщательно перемешать взвесь.
Степень разведения основной взвеси зависит от органолептических показателей корма, а именно
наличия признаков порчи: потемнения, побурения, грибного налета различного цвета (черный, белый,
сероватый и др.), слежавшихся пластов, наличия головни и спорыньи и/или наличия затхлого, плесне­
вого. гнилостного и других запахов, не свойственных данному корму.
При отсутствии признаков порчи в корме для посева используют взвесь № 3.
Если в корме присутствуют признаки порчи, то для посева используют взвесь Ns 4.
11.2 Проведение посева
11.2.1 Посев проводят сразу же после приготовления последней взвеси, не давая ей отстояться,
при этом 1 см3 взвеси равномерно распределяют по всей поверхности питательной среды, слегка на­
клоняя чашки Петри в разные стороны.
Для идентификации различных микроскопических грибов применяют агар Чапека для аспергил-
лов и пенициллов. а сусловый агар — для мукоров и фузариев.
11.2.2 Число засеянных чашек зависит от выбранной степени разбавления: при посеве взвеси
No 3 используют пять чашек, при посеве взвеси No 4 — восемь чашек.
11.3 Инкубация посевов
Посевы инкубируют в термостате при (22—25) °С в течение 5—7 сут. Рост и спороношение боль­
шинства грибов, контаминирующих корм, становится заметным уже через 2— 3 сут.
12 О бработка результатов испы таний
Обработку результатов испытания и оценку санитарно-микологического качества корма проводят
в соответствии с правилами санитарно-микологических исследований кормов [1] и по нормативным до­
кументам. действующим на территории государства, принявшего стандарт.
5

ГОСТ 13496.6—2017
Библиография
[1] Методические указания по санитарно-микологической оценке и улучшению качества кормов, утвержденные
Министерством сельского хозяйства СССР 25 февраля 1985 г.
6

ГОСТ 13496.6—2017
УДК 636.085.3:006.354 МКС 65.120
Ключевые слова: корма, комбикорма, кормовые смеси, концентраты, кормовые добавки, комбикормо­
вое сырье, выделение, питательная среда, микроскопические грибы
7

Редактор переиздания Н.Е. Рагузина
Технический редактор И.Е. Черепкова
Корректор М.С. Кабашова
Компьютерная верстка М.В. Лебедевой
С д а н о а н а б о р 1 0 .0 8 2 0 2 0 . П о д п и с а н о в п е ч а т ь 0 1 .1 0 2 0 2 0 Ф о р м а т 6 0 « 8 4 % . Г а р н и т у р а А р и а п .
У с п . п е ч . п . 1 .4 0 . У ч . м м . я . 1,28.
П о д г о т о в л е н о и а о с н о в е э л е к т р о н н о й в е р с и и , п р е д о с т а в л е н н о й р а з р а б о т ч и к о м с т а н д а р т а
С о з д а н о в е д и н и ч н о м и с п о л н е н и и в о Ф Г У П « С Т Л Н Д А Р Т И И Ф О Р М »
д п я к о м п л е к т о в а н и я Ф е д е р а л ь н о г о и н ф о р м а ц и о н н о г о ф о н д а с т а н д а р т о в .
1 1 7 4 1 8 М о с к в а , Н а х и м о в с к и й пр -т , д . 3 1 . к 2
W A 4v.gosbn fo.ru in fo @ g o s b n fo .n j
ÃÎÑÒ 13496.6-2017