ГОСТ 16446-78 Комплемент сухой для реакции связывания комплемента. Технические условия

Цена J коп.
& J - у
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
СОЮЗА ССР
КОМПЛЕМЕНТ СУХОЙ ДЛЯ РЕАКЦИИ
СВЯЗЫВАНИЯ КОМПЛЕМЕНТА
ТЕХНИЧЕСКИЕ УСЛОВИЯ
ГОСТ 16446-78
Издание официальное
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СТАНДАРТОВ
СОВЕТА МИНИСТРОВ СССР
Москва
îöåíêà çäàíèé

РАЗРАБОТАН Всесоюзным государственным научно-контрольны**
институтом ветеринарных препаратов
Директор Д- Ф. Осидзе
Руководитель темь» А. Н. Шаров
Исполнители: А. Н. Шароя, А. М. Силаев, М. К. Шевченко, Л. Я. Телишев-
ская, А. А. Гринев, М. X. Демченко
ВНЕСЕН Министерством сельского хозяйства СССР
Член Коллегии А. Д. Третъяков
ПОДГОТОВЛЕН К УТВЕРЖДЕНИЮ Всесоюзным научно-исследова­
тельским институтом стандартизации (ВНИИС|
Директор А. В. Гличев
УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государствен­
ного комитета стандартов Совета Министров СССР от 9 марта
<978 г. № 635

* Д К 612.39t.12 : 619 : 006.354 Группа Р3«
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР
КОМПЛЕМЕНТ СУХОЙ ДЛЯ РЕАКЦИИ
СВЯЗЫВАНИЯ КОМПЛЕМЕНТА
Тонические условна
ГОСТ
16446-78
Lyophlllzated compliment for the compliment fixation
test. Specification Ваамен
ГОСТ 16446— 70
Постановлением Государственного комитета стандартов Совета Министров СССР
« т 9 марта 1978 г. Не 635 срок действия установлен
Настоящий стандарт распространяется на сухой комплемент,
«редставляющий собой сыворотку крови морских свинок, стаби­
лизированную сернокислым магнием и высушенную методом л мо­
билизации.
Сухой комплемент предназначен для применения в качестве
компонента реакции связывания комплемента (РСК) в ветерина­
рии.
1.1. Сухой комплемент для реакции связывания комплемента
готовят в соответствии с требованиями настоящего стандарта по
технологическим правилам, утвержденным в установленном по­
рядке.
1.2. По физико-химическим и биологическим свойствам сухой
■комплемент для РСК должен соответствовать требованиям и нор­
мам, указанным в табл. 1.
Издание официально*
< 01.01.197* г.
до 01.01.1984 г.
Несоблюдение стандарта преследуется по закону
1. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ
1 З а . 463
Парапечатка воспрещена
©Издательство стандартов, 1978

Стр. 2 г о с т ( «4 4 4- т »
Таблица 1
Наименование показателя Характеристика я норма
Внешний вид Пористая однородная масса белого или розо­
вого цвета, без плесени и посторонней примеси
РйсгиоримоеП) препара­
та и прозрачность раствора
При добавлении в ампулу (флахон) физиоло­
гического раствора или дистиллированном йоды
в объеме, указанном на ампуле (флаконе), дол­
жен полностью раствориться в течение 2—3 мни.
Раствор прозрачный, слегка опалесцирующий,
желтовато-розового цвета
Массовая доля сернокис­
лого магния. % 5.0 ±0.5
Влажность. %. не более 3.0
Безвредность Не должен вызывать гемолиза эритроцитов ба­
рана и отсутствии гемолизина
Активность (тн7р) в ге­
молитической системе в
разведении 1: 20. не ниже0.31
2. ПРАВИЛА ПРИЕМКИ
2.1. Сухой комплемент для РСК принимают сериями. Под се­
рией следует понимать определенное количество препарата, изго­
товленное в результате одноразового (одновременного) смешива­
ния в одной емкости исходного сырья, разлитое в течение одного
рабочего дня по ампулам (флаконам), замороженное и высушен­
ное в одном или нескольких сушильных вакуум-аппаратах при
одном и том же режиме, получившее свой номер и оформленное
одним документом о качестве.
2.2. Каждая серия сухого комплемента для РСК должна быть
принята на предприяти'и-изготовнтеле государственным контроле­
ром Всесоюзного государственного научно-контрольного института
ветеринарных препаратов Министерства сельского хозяйства
СССР.
2.3. Для контроля качества сухого комплемента от каждой се­
рин отбирают 40 ампул (флаконов).
2.4. При получении неудовлетворительных результатов хотя
бы по одному из показателей по нему проводят повторные испы­
тания на удвоенном количестве ампул (флаконов), отобранных
от той же серии сухого комплемента.
Результаты повторных испытаний распространяют на всю се­
рию.

ГОСТ 16444—71 Стр. 3
2.5. Контроль качества определенной серии сухого комплемен­
та по требованию потребителя проводит государственный контро­
лер на предмриятнн-нзготовнтеле или Всесоюзный государствен­
ный научно-контрольный институт ветеринарных препаратов Ми­
нистерства сельского хозяйства СССР.
3. МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЯ
3.1. Метод отбора проб
3.1.1. Ампулы (флаконы) отбирают из разных мест упаковки.
20 ампул (флаконов) используют для испытаний, а 20 ампул
(флаконов) хранят в архиве государственного контролера.
3.2. Для определения внешнего вида, цвета, однородности, на­
личия или отсутствия посторонней примеси, плесени или измене­
ния консистенции ампулы (флаконы) с сухим комплементом
встряхивают и просматривают.
3.3. Для определения растворимости препарата и прозрачности
раствора в ампулу (флакон) с сухим комплементом при помощи
пипетки или шприца вливают физиологический раствор или ди­
стиллированную воду в количестве, указанном на ампуле (фла­
коне). После встряхивания препарат должен полностью раство­
риться в течение 2—3 мин. Прозрачность раствора определяют
•визуально в проходящем свете при периодическом встряхивании.
3.4. Определение массовой доли сернокислого
магния
3.4.1. Оборудование и реактивы
Для проведения испытания применяют:
колбы мерные вместимостью 100, 250 и 1000 мл по ГОСТ
1770—74;
колбы плоскодонные вместимостью 200 мл, стаканы лаборатор­
ные по ГОСТ 10394—72;
воду дистиллированную по ГОСТ 6709—72;
аммиачный буферный раствор;
трнлон Б, 0,1 н. раствор;
хромовые индикаторы: кислотный хром темно-синий или хро­
мовый черный специальный;
фиксанал MgS0<-7H20 - 0,01 г-экв или M gS04-7H20 по ГОСТ
4523—77, х. ч., ч. д. а.
3.4.2. Подготовка к испытанию
3.4.2.1. Приготовление аммиачного буферного раствора.
Берут 2 г хлористого аммония к растворяют в дистиллирован­
ной воде, добавляют 10 мл 25%-кого водного раствора аммиака
.н доводят объем дистиллированной водой до 100 мл.
3.4.2.2. Приготовление растворов хромовых индикаторов.
0,5 г индикатора растворяют в 20 мл аммиачного буферного
2*

Стр. 4 ГОСТ 16444—78
раствора и доводят до 100 мл этиловым спиртом.
3.4.2.3. Приготовление 0,1 н. раствора трилона Б.
Берут навеску 18,6 г трилона Б. растворяют в дистиллирован­
ной воде, доводят объем до 1 л, перемешивают н фильтруют, если
раствор получился мутным.
3.4.2.4. Установка титра трилона Б.
Готовят 0.01 и. раствор соли магния: растворяют содержимое
фиксанала M gS04-7H20 или навеску 1,2325 г M gS04-7H20 в 1 л
дистиллированной воды. В колбу вместимостью 200 мл вносят
100 мл 0.01 н. раствора соли магния. 5 мл аммиачного буферного*
раствора, 5—7 капель индикатора, смесь медленно титруют при-
интенсивном перемешивании 0.1 н. раствором трилона Б до отчет­
ливого изменения цвета раствора.
Поправочный коэффициент к титру трилона Б (/Стр) вычисля­
ют по формуле
к - 10 «м,
ЛтР - v
где v — количество 0,1 н. раствора трилона Б. израсходованное
на титрование 100 мл 0,01 н. раствора M gS04, мл;
/См* — поправочный коэффициент к титру 0,01 н. раствора M gS04.
3.4.3. Проведение испытания
Сухой комплемент из пяти ампул растворяют в дистиллирован­
ной воде, переносят в мерную колбу вместимостью 250 мл и дово­
дят объем до метки. Затем берут 50 мл раствора, прибавляют к
нему 5 мл аммиачного буферного раствора, 5—6 капель раствор»
хромового индикатора и титруют при энергичном перемешиванию
0,1 н. раствором трилона Б до изменения цвета раствора.
3.4.4. Обработка результатов
Массовую долю сульфата магния в препарате (X) вычисляют
по формуле-
v ff/C,{,-0.01232 100
Л
----------------2 ’
где v — количество 0,1 н. раствора трилона Б, израсходованное
на титрование пробы, мл;
/Стр — поправочный коэффициент к титру 0,1 н. раствора три­
лона Б;
0,01232 — количество M gS04-7H20 , соответствующее 1 мл 0,1 ik
раствора трилона Б, г;
2 — количество комплемента в ампуле, мл.
3.5. Определение влажности
3.5.1. Аппаратура, материалы и реактивы
Для проведения испытания применяют:
весы аналитические;

ГОСТ 16446—71 Стр. 5
шкаф сушильный лабораторный на 105°С:
стаканчики для взвешивания с притертыми крышками (бюксы)
по ГОСТ 7148—70 диаметром 2.5 см. высотой 3,5 см;
эксикатор по ГОСТ 6371—73.
3.5.2. Проведение испытания
В высушенную до постоянной массы бюксу помещают содер­
жимое одной ампулы сухого комплемента (вскрытие ампул и пе­
ренос вещества в бюксу производят быстро в связи с большой
гигроскопичностью материала). Бюксу с навеской взвешивают с
погрешностью пе более 0,0002 г. Пробу высушивают в сушильном
шкафу при 100°С в течение 1 ч. Затем бюксу охлаждают в экси­
каторе в течение 30 мин и снова взвешивают.
3.5.3. Обработка результатов
Влажность (X)) в процентах вычисляют по формуле
у ( я —eijJ-lOO
где m — первоначальная масса навески сухого комплемента до
высушивания, г;
т , — масса навески после высушивания, г.
За окончательный результат принимают среднее арифметичес­
кое результатов трех параллельных определений. Допускаемые
расхождения между результатами параллельных определений не
должны превышать 0.5%.
3.6. Определение а ктивности (титр а) и безвред­
ности
Активность сухого комплемента определяют по полному
(100%-ному) гемолизу эритроцитов в гемолитической системе.
Титром комплемента называют наименьшее его количество
(наибольшее разведение), при котором в течение 10 мин при
37—38°С наступает полный гемолиз 0.5 мл 2.5%-иой взвеси эри­
троцитов барана в присутствии 0,5 мл гемолитической сыворотки,
взятой в удвоенном титре по ГОСТ 16445—78, в общем объеме
жидкости 2,5 мл.
Безвредность комплемента характеризуется полным отсутстви­
ем гемолиза эритроцитов барана в пробирке без гемолитической
сыворотки.
3.6.1. Оборудование и реактивы
Для проведения испытания применяют:
центрифугу;
баню водяную;
штативы для пробирок;
пробирки стеклянные по ГОСТ 10515—75;
флаконы вместимостью 250 мл;

O p . 6 ГОСТ 1644ft— п
колбы стеклянные вместимостью 50, 100 мл по ГОСТ
1770-74;
бусы стеклянные или металлические;
воронки стеклянные;
иглы для взятия крови;
пипетки мерные вместимостью 1, 2. 5 и 10 мл по ГОСТ
20292-74;
физиологический раствор хлористого натрия pH 6,8—7,2;
марлю.
3.6.2. Подготовка к испытанию
З.6.2.1. Приготовление 2,5%-пой взвеси эритроцитов барана.
Кровь у барана берут утром, до кормления, из яремной вены,
во флакон со стеклянными или металлическими бусами или без
них. Встряхивают 7—10 мин, затем фильтруют через марлю, эри­
троциты 3—5 раз отмывают физиологическим раствором путем
центрифугирования при 2500 об/мин до полного обесцвечивания
промывной жидкости. Из осадка эритроцитов готовят 2,5%-ную
взвесь на физиологическом растворе.
3.6.3. Проведение испытания
Комплемент в разведении 1:20 на физиологическом растворе
разливают в ряд пробирок дозами, начиная с 0.1 до 0.4 мл, увели­
чивая дозу в каждой следующей пробирке на 0.03 мл (0,10; 0,13;
0,16 мл и т. д. табл. 2). Затем в пробирки доливают физиологиче­
ский раствор до 0,5 мл общего объема жидкости (0,40; 0,37;
0,34 мл и т. д.). После этого в каждую пробирку вносят по 1 мл
физиологического раствора, по 0,5 мл 2,5%-ной взвеси эритроци­
тов барана и по 0,5 мл гемолизина в удвоенном титре. Одновре­
менно в штатив устанавливают три пробирки для контроля.
В первую пробирку контроля вносят 0.4 мл комплемента в разведе­
нии 1:20, 0,5 мл 2,5%-ной взвеси эритроцитов барана и 1,6 мл
физиологического раствора; во вторую пробирку вносят 0.5 мл
2,5%-ной взвеси эритроцитов барана, 0,5 мл гемолизина в удвоен­
ном титре и 1,5 мл физиологического раствора; в третью пробир­
ку— 0,5 мл 2,5%-ной взвеси эритроцитов барана и 2,0 мл физио­
логического раствора (табл. 2). Первая пробирка служит для
контроля безвредности комплемента без гемолизина, вторая — для
контроля гемолизина и третья — устанавливает наличие резистент­
ности эритроцитов барана.
Штатив с пробирками встряхивают и помещают в водяную
баню при 37—38°С на 10 мни.
3.6.4. Обработка результатов
Штатив с пробирками извлекают из бани и проводят учет
реакций в проходящем свете. Комплемент считают активным при
титре не ниже 0,31 и безвредным при отсутствии гемолиза эритро­
цитов в первой пробирке контроля.

Лозы компонентов, ил. Ы1 орс<1иро« номеров
ГОСТ 16446-78 Стр. 7
i s
ч
i 1
<о
0.50
2.00
«•1
0,50
о..ад
1,50
-
0,40
0.10
0,50
1.50
=
О О О о о
v — й ©
о ' о" о" о" —’
®
0.37
0.13
0,50
0,50
1.00
S1
0.34
0,16
0,50
0,50
1.00
со
0,31
0.19
0,50
0,50
1.00
г*. Я Я 8 8 8
о" о о о —
< 0
0.25
0,2.5
0,50
0,50
1.00
«А
0.22
0.28
0,50
0.50
1,00
-
0.19
0,31
0,50
0,50
1.00
п
0,16
0,34
0,50
0,50
1.00
«
0,13
0,37
0.50
0.50
1,00
-
0,10
0.40
0.50
0.50
1.00
2
г
«4
-
П
>
О
ас
*1
" «г
S3 См

Стр. 8 ГОСТ 16448-78
4. УПАКОВКА, МАРКИРОВКА, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ
4.1. Комплемент фасуют по 2 мл в хорошо промытые стериль­
ные ампулы БЦ Ж или инсулиновые и пенициллиновые флаконы и
подвергают лнофилизации. Ампулы запаивают под вакуумом, а
флаконы заполняют азотом или сухим воздухом, закрывают проб­
ками и закатывают алюминиевыми колпачками.
4.2. На ампулу (флакон) наклеивают этикетку' или несмывае­
мой краской по стеклу наносят:
наименование биопрепарата;
количество его в миллилитрах;
номер серии.
4.3. Ампулы (флаконы) с сухим комплементом по 10—20 шт.
упаковывают в картонные коробки с разделительными перегород­
ками. На каждую коробку наклеивают или наносят этикетку, на
которой указывают:
наименование и товарный знак предприятия-изготовителя;
наименование препарата;
номер серии;
номер госконтроля;
дату изготовления;
титр в гемолитической системе;
количество ампул (флаконов) в коробке;
количество доз в ампуле по титру;
количество физиологического раствора, которое необходимо
ввести в ампулу (флакон) для превращения сухого комплемента
в состояние «нативной сыворотки»;
срок годности;
условия хранения;
фамилии и номер браковщика и укладчика:
обозначение настоящего стандарта.
4.4. Коробки с ампулами (флаконами) сухого комплемента
упаковывают в деревянные, фанерные или полистироловые ящики
массой брутто не более 15 кг. Внутрь каждого ящика вкладывают
контрольный лист с указанием:
наименования препарата;
количества коробок в ящике;
номера серии;
даты упаковки;
фамилии или номера упаковщика. г/чг-т
4.5. Каждую транспортную единицу маркируют по ГОСТ
14192—77 с указанием следующих дополнительных данных:
наименования предприятия-поставщика и его адреса;
наименования организации-потребителя и его адреса;
наименования биопрепарата;
количества препарата в ящике;

ГОСТ 16446—Л Стр. 9
массы брутто;
номера серии;
даты изготовления;
срока годности;
условий хранения;
обозначения настоящего стандарта.
4.6. Сухой комплемент транспортируют всеми видами транс­
порта при температуре 2— 15°С.
Допускается транспортировать препарат при более высокой
температуре, но не выше 20°С, прм этом срок транспортирования,
должен быть не более 10 сут.
4.7. Сухой комплемент хранят в чистом, сухом н темном по­
мещении при температуре 2— 15°С.
4.8. Срок годности сухого комплемента — 2 года со дня изго­
товления. По истечении указанного срока годность препарата
устанавливают по соответствию показателя титра комплемента »
гемолитической системе требованиям настоящего стандарта. Титр
определяется .потребителем перед постановкой реакции связыва­
ния комплемента.

Группа Р31
Изменение J* 1 ГОСТ 16446—78 Комплемент сухой для реакции связывания
комплемента. Технические условия
Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 15.12.86
J* 3831 срок введения установлен
с 01.05.87
По всему тексту стандарта заменить единицу: мл на си’.
Пункт 3.1.1. Заменить слово: «упакозки» на «упаковочных единиц».
Пунхт 3 4Л. Заменить ссылку: ГОСТ 10094—72 на ГОСТ 25336—82.
Пункт 3.6.2.1. Заменить слова: «путем центрифугирования при 2500 об/мин»
ха «путем центрифугирования с частотой вращения 2600 мин-' по 10 мин».
Раздел 3 дополнить пунктом — 36.2.2: «3 6.2.2 Приготовление гемолитичес­
кой системы
Готовят раствор гемолизина, взятого в удвоенном титре (при титре 1:1000
готовят разведение 1:500, для чего берут 0,1 см» гемолизина и разводят а 49,9
«к» физиологического раствора, и т. д.) и смешива»от с равным количеством
взвеси эритроцитов путем медленного вливания его во взвесь эритроцитов пря
постоянном ес перемешивании. Гемолитическую систему выдерживают в водяной
бане при температуре 37—38 °С в течение 30 мян.
Для использования э контроле оставляют в отдельных пробирках по
3 —5 см* взвесь эритроцитов и раствора гемолизина*.
(Продолжение см. с. 394)
393

(продолжение изменения к i i/c i lo ttu —tof
Таблица 2
Компонент
Д о »ы КОМВОВеИТО», ем*, д л я п р о в и с и номеров
К онтрольны »
п роби рк а
1 I 2 I »'
1. Компле­
мент в разведе­
нии 1:20
2. Физиологи
четкий раствор
$. Гемолити­
ческая система
4. Взвесь
зрнтроциюв
5. Раствор ге­
молизина
6. Физиологи
ческий раствор
0,Ю0.13
0,40 0.37
1,00
1,001,00
0,16 0,19 0.22 0,26 0.28 0.31 0,34 0,37 0,40 0,50
0.340,31 0,28 0,25 0,22 0,19 0,16 0.13 0,10
1.00 1.00
1,00
1,00 1,00
1,00 1.00
1,00
1,00 1,00
1.00 1.00
1,001.00
1,00 1.00 1.00
1,00
0,50
1.00 1.501.50
0,50 0,50
0,50 -
2,00
(Продолжение см с. 395)
394

(Продолжение изменения к ГОСТ 16446—76)
I Пункт 3.6,3. н таблицу 2 изложить в новой редакции: {ем. е. 394): «3.6.3- Ком­
племент в разведении 1:20 на физиологическом растворе разливают в ряд про­
бирок в дозах с 0.1 см» до 0.4 см3, увеличивая дозу в каждой следующей про­
бирке иа ОД» см4 (0,10; 0,13; <Х1в см4 я т. д, в соответствии с табл. 2). Загам
в пробирки доливают физиологический раствор до 0,5 см4 общего объема жид­
кости (соответственно 0.40; 03?; 0,34 см4 и т. д ) . После этого в каждую про­
бирку вносят no 1 см4 физиологического раствора и no 1 см4 гемолитической
системы. Одновременно в штатив устанавливают три пробирки контроля В
первую пробирку контроля вносят 0,5 см4 комплемента в разведенки 1:20,
0.5 см1 взвеси эритроцитов и 1.5 см4 физиологического раствора; во вторую
(Продолжение см. с. 396)

(Продолжение изменения к ГОСТ 16446—78)
пробирку вносят 0,5 см3 взвеси эритроцитов, 0.5 см’ раствора гемолизина в
1.5 см’ физиологического раствора: в третью пробирку—0,5 см3 взвеси эритро
цигов и 2 см3 физиологического раствора (табл. 2). Первая пробирка являете
контролем безвредности комплемента, вторая пробирка — контролем безвред­
ности гемолизина, третья — резистентности эритроцитов.
Штатив с пробирками встряхивают к помещают в водяную баню прн тем­
пературе 37—38 °С на 10 мин».
Раздел 4. Наименование. Заменить слово: «Упаковка» на «Упаковывание*
Пункт 4.4. Пятый абзац. Заменить слово: «упаковки» на «упаковывания?
(ИУС № 3 1987 г.)

Изменение М 2 ГОСТ 16446—78 Комплемент сухо* для реакции связывания
комплемента. Технические условия
Утверждено и введено в действие Постановлением Государственного комитета
СССР по стандартам от 06,07.88 .4 2629
Дата введения 01.01.89
По всему тексту стандарта заменить единицу и слова: мл аа ом», х ка дм».
«0,1 в. раствор трилоиа Ь» на 0.1 моль/дм* (0.1 н.), «0.1 н. раствора MeSO.» на
«0,006 моль/дм* (0,01 н.).
(Продо.гисение см. е. 344)

(Продолжение изменения к ГОСТ 16446—78>
Пункт 2.5. Заменить слова: «Министерство сельского хозяйства СССР» н»
«Госагропром СССР».
Пункты 3.4.2.4 (третей абзац), 3.4.4, 4.2 (грсткй абзац). Заменить слово:
«количество» на «объем».
Пункт 3.5.1. Заменить ссылки: ГОСТ 7М&—70 я ГОСТ 6371—73 на ГОСТ
25336—82.
Пункт 3.6.1. Заменить ссылку: ГОСТ 10515-75 на ГОСТ 21336-82.
(ИУС .V, и 1033 г.)

4
Редактор Л. Б. Аграновская
Технический ре диктор В. Ю. Смирнова
Корректор А. Г. Старостин
Одно в н.С, >1.03.78 Поди. ■ a rt 9i.Oi.7i О,75 а. я. 0.S2 уе.чяд. я. Тнр. 1(»0<3 Ценя 3 коя.
0»дет <3ш Почета» -Издательство стаадяртса. Москва. Д-367. НоазпреспемскиА пер.. >
Inn. «МосиоьсххД вечатаяк». Москва. Ляд «в пер.. 6 3»к. <51
ÃÎÑÒ 16446-78