ГОСТ 31477-2012 Мясо и мясные продукты. Иммунопреципитационный метод определения массовой доли животного (свиного, говяжьего, бараньего) белка

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ
(МГС)
INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION, METROLOGY AND CERTIFICATION
(ISC)
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ
СТАНДАРТ
ГОСТ
31477-
2012
МЯСО И МЯСНЫЕ ПРОДУКТЫ
Иммунопреципитационный метод определения
массовой доли животного (говяжьего, свиного,
бараньего) белка
Издание официальное
Москва
Стандартинформ
2012
îïðåäåëåíèå ïðî÷íîñòè áåòîíà

ГОСТ 31477—2012
Предисловие
Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандар­
тизации установлены ГОСТ 1.0—92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положе­
ния» и ГОСТ 1.2—2009 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные,
правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, приме­
нения, обновления и отмены»
Сведения о стандарте
1 РАЗРАБОТАН Государственным научным учреждением Всероссийским научно-исследова­
тельским институтом мясной промышленности имени В.М. Горбатова Российской академии сельско­
хозяйственных наук (ГНУ ВНИИМП им. В.М. Горбатова Россельхозакадемии)
2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (прото­
кол № 41 от 23—24 мая 2012 г.)
За принятие проголосовали:
Краткое наименование страны
по МК (ИСО 3166) 004—97
Код страны
по МК (ИСО 3166) 004—97
Сокращенное наименование национального органа
по стандартизации
Азербайджан AZ Азстандарт
Армения AM Минэкономики Республики Армения
Беларусь BY Госстандарт Республики Беларусь
Казахстан KZ Госстандарт Республики Казахстан
Кыргызстан KG Кыргызстандарт
Молдова MD Молдова-Стандарт
Российская Федерация RU Росстандарт
Таджикистан TJ Таджикстандарт
Узбекистан UZ Узстандарт
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 12 октября
2012 г. № 488-ст введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с
1 июля 2013 г.
5 Настоящий стандарт подготовлен на основе применения ГОСТ Р 53514—2009
6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта публику­
ется в указателе «Национальные стандарты».
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в указателе «Национальные
стандарты», а текст изменений — в информационных указателях «Национальные стандарты». В
случае пересмотра или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет
опубликована в информационном указателе «Национальные стандарты»
© Стандартинформ, 2012
В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизве­
ден, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального
агентства по техническому регулированию и метрологии

ГОСТ 31477—2012
Содержание
1 Область применения........................................................................................................................................ 1
2 Нормативные ссылки........................................................................................................................................ 1
3 Сущность метода.............................................................................................................................................. 2
4 Диапазоны измерений и метрологические характеристики метода............................................................2
5 Отбор п р о б ....................................................................................................................................................... 2
6 Средства измерений, оборудование, материалы и реактивы................................................................... 2
7 Подготовка к выполнению измерений............................................................................................................3
8 Проведение и зм е р е н и й ..................................................................................................................................3
9 Обработка результатов.....................................................................................................................................4
10 Требования безопасности.......................................................................................................................... 4
Библиография...................................................................................................................................................... 6
III

ГОСТ 31477—2012
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
МЯСО И МЯСНЫЕ ПРОДУКТЫ
Иммунопреципитационный метод определения массовой доли животного
(говяжьего, свиного, бараньего) белка
Meat and meat products.
Immune Method of determination of animal (pork, beef, mutton) proteins
Дата введения — 2013— 07— 01
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на мясо и мясные полуфабрикаты и устанавливает имму­
нопреципитационный метод определения массовой доли животного (говяжьего, свиного, бараньего)
белка.
Стандарт предназначен для идентификации свиного, говяжьего или бараньего белка в составе
мясного сырья и мясных продуктов, не подвергнутых тепловой обработке.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные
стандарты:
ГОСТ 12.1.004—91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие
требования
ГОСТ 12.1.007—76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация
и общие требования безопасности
ГОСТ 12.1.019—79 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие тре­
бования и номенклатура видов защиты
ГОСТ 12.4.009—83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объ­
ектов. Основные виды. Размещение и обслуживание
ГОСТ 1770—74 (ИСО 1042—83, ИС0 4788—80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилин­
дры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 6709—72 Вода дистиллированная. Технические условия
ГОСТ 9656—75 Реактивы. Кислота борная. Технические условия
ГОСТ 10652—73 Реактивы. Соль динатриевая этилендиамин-N, N, N', N'-тетрауксусной кислоты
2-водная (трилон Б). Технические условия
ГОСТ 20903—75 Кюветы прямоугольные кварцевые для спектрофотометров. Основные размеры.
Технические требования
ГОСТ 25011— 81 Мясо и мясные продукты. Методы определения белка
ГОСТ 25336—82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры
и размеры
ГОСТ 26678—85 Холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные пара­
метрического ряда. Общие технические условия
Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылоч­
ных стандартов по указателю «Национальные стандарты», составленному по состоянию на 1 января текущего года,
и по соответствующим информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт
Издание официальное
1

ГОСТ 31477—2012
заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (изменен­
ным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него,
применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
3 Сущность метода
Метод основан на проявлении особых свойств защитных систем высших позвоночных — выраба­
тывать новые сывороточные белки (антитела) при введении в организм посторонних для него веществ
(антигенов). Используют диагностическую преципитирующую сыворотку к конкретному виду животного
белка, вызывающую образование нерастворимого комплекса антиген-антитело.
4 Диапазоны измерений и метрологические характеристики метода
4.1 Диапазон измерений массовой доли животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка от 1 %
до 85 %.
4.2 Метрологические характеристики метода при доверительной вероятности 0,95 приведены в
таблице 1.
Таблица 1
Наименование
показателя
Диапазон измерений
массовой доли, %
Границы
относительной
погрешности, + 5, %
Предел
повторяемости,
Гэтн.) %
Предел
воспроизводимости,
Roth., %
Массовая доля живот­
ного белка, %
От 1 до
85 вкпюч. 30 24 38
5 Отбор проб
5.1 Отбор проб — по [1].
5.2 Пробу хранят в холодильнике при температуре от 0 °С до 5 °С до полного завершения испыта­
ния в течение суток.
Допускается хранение проб при температуре от минус 20 °С до минус 10 °С в герметичной упаковке
в течение одной недели с даты отбора проб на исследование.
6 Средства измерений, оборудование, материалы и реактивы
Спектрофотометр типа «Аквилон»*, обеспечивающий измерения в диапазоне длин волн от 200 до
900 нм.
Кюветы кварцевые толщиной 1 см по ГОСТ 20903.
Весы лабораторные с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешива­
ния не более + 0,1 мг.
Микроизмельчитель тканей или гомогенизатор с частотой вращения 8000—24000 об/мин.
Центрифуга с регулируемой скоростью вращения до 8000 об/мин.
Пробирки центрифужные по ГОСТ 25336.
Аппарат встряхивающий.
Холодильник бытовой по ГОСТ 26678.
Дозатор пипеточный переменного объема.
Колбы мерные 2-го класса точности вместимостью 250 см3 по ГОСТ 1770.
Цилиндр мерный 2-го класса точности вместимостью 250 см3 по ГОСТ 1770.
Воронки стеклянные ВД-1-100 ХС по ГОСТ 25336.
Диагностическая сыворотка.
Свинина, говядина, баранина с массовой долей белка по Кьельдалю не менее 18 % для использо­
вания в качестве контрольного образца.
* Данная информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта.
2

ГОСТ 31477—2012
Соевый изолят с массовой долей белка по Кьельдалю не менее 85 %.
Кислота борная по ГОСТ 9656, ч.
2-амино-2(гидроксиметил)-1,3-пропандиол (ТРИС) с массовой долей основного вещества 99,9 %.
Соль динатриевая этилендиамин-N, N, N', N'-тетрауксусной кислоты (трилон Б) по ГОСТ 10652,
ч. д. а.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками, обо­
рудования с техническими характеристиками и реактивов по качеству не ниже указанных в настоящем
стандарте.
7 Подготовка к выполнению измерений
7.1 Приготовление растворов
7.1.1 Приготовление концентрированного буферного раствора
Навеску 2-амино-2(гидроксиметил)-1,3-пропандиола (ТРИС) массой 15,0 г и навеску трилона Б
массой 1,5 г с помощью воронки переносят в мерную колбу вместимостью 250 см3 и при перемешивании
добавляют 100— 150 см3 дистиллированной воды. Полученный раствор перемешивают, в него добавля­
ют постепенно 5,5 г борной кислоты и доводят объем раствора до метки дистиллированной водой. Рас­
твор тщательно перемешивают до растворения осадка.
7.1.2 Приготовление рабочего буферного раствора
В мерную колбу вместимостью 250 см3 с помощью мерного цилиндра вносят 50 см3 концентриро­
ванного буферного раствора. Раствор в колбе доводят до метки дистиллированной водой, тщательно
перемешивают и получают рабочий буферный раствор, содержащий в 1 см3 0,012 г ТРИС, 0,001 г трило­
на Б и 0,0044 г борной кислоты.
7.2 Приготовление испытуемого экстракта пробы
7.2.1 Навеску пробы массой 5,0 г перемешивают с 5 см3 рабочего буферного раствора в гомогени­
заторе в течение 5 мин и выдерживают смесь 1 ч при температуре от 5 °С до 8 °С, периодически встряхи­
вая в течение 5 мин.
7.2.2 Смесь центрифугируют при 5000 об/мин в течение 20 мин. Для измерений используют вер­
хний прозрачный слой, содержащий экстракт анализируемого белка.
7.3 Приготовление двухкомпонентных модельных мясорастительных смесей
для построения градуировочного графика
Навески по 25,0 г свинины (говядины или баранины) смешивают с навесками 400,0 г и 100,0 г сое­
вого изолята и навески по 100,0 г свинины (говядины или баранины) смешивают с навесками 100, 30,15
и 3,5 г соевого изолята.
Каждую смесь перемешивают на микроизмельчителе тканей в течение 30 мин до образования го­
могенной массы. Допускается использование уменьшенных навесок в случае приготовления смеси пу­
тем растирания в ступке. Получают двухкомпонентные модельные мясорастительные смеси, массовая
доля животного (свиного, говяжьего, бараньего) белка в которых относительно массовой доли общего
белка равна 1,3 %; 5,0 %; 17,5 %; 41,4 %; 58,5 % и 86,1 %.
Предварительно определяют массовую долю общего белка методом Кьельдаля по ГОСТ 25011.
8 Проведение измерений
8.1 Измерение испытуемых растворов
8.1.1 20 мм3 экстракта пробы смешивают с 400 мм3 рабочего буферного раствора, измеряют фо­
новое поглощение на спектрофотометре при X = 405 нм (контроль), затем добавляют 20 мм3 диагности­
ческой сыворотки, содержащей антитела, к определяемому виду белка, проводят реакцию осаждения
при постоянном встряхивании смеси в течение 1 ч. Для выявления специфического белка измеряют
оптическую плотность среды в кювете с толщиной оптического слоя 1 см.
8.1.2 Для подтверждения действия диагностической преципитирующей сыворотки на животный
белок параллельно проводят анализ контрольного образца, не содержащего определяемый белок.
8.1.3 Для каждого испытуемого раствора проводят два измерения, по результатам которых с по­
мощью градуировочного графика находят средние значения массовой концентрации животного (говяжь­
его, свиного, бараньего) белка в этих растворах.
з

ГОСТ 31477—2012
8.2 Построение градуировочного графика
Градуировочный график строят по результатам двукратного определения в соответствии с 8.1.1
массовой доли животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка в двухкомпонентных модельных мясо­
растительных смесях, содержащих животный белок и добавки растительного соевого белка, соответ­
ственно в таблицах 2— 4.
Таблица 2
Оптическая плотность среды (D4 0 5)
при 405 нм 0,070 0,075 0,100 0,158 0,200 0,260
Массовая доля свиного белка в об­
разце С, % от общего белка 1,3 5,0 17,5 41,4 58,5 86,1
Таблица 3
Оптическая плотность среды ( D 4 0 5 )
при 405 нм 0,065 0,085 0,110 0,135 0,155 0,175 0,200 0,225 0,250 0,275
Массовая доля говяжьего белка в
образце С, % от общего белка 1 10 20 30 40 50 60 70 80 90
Таблица 4
Оптическая плотность среды (D4 0 5)
при 405 нм 0,0600,090 0,115 0,130 0,160 0,170 0,190 0,230 0,260 0,280
Массовая доля бараньего белка в
образце С, % от общего белка 11 110 220 330 440 550 660 770 880 990
9 Обработка результатов
9.1 Массовую долю животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка Бж, %, относительно массо­
вой доли общего белка, вычисляют по формуле
Бж = -^~ ЮО, (1)
ь к
где С — среднеарифметическое значение массовой доли животного (говяжьего, свиного, бараньего)
белка в испытуемой пробе, %;
Бк — массовая доля общего белка в анализируемом образце, определенная методом Кьельдаля, %.
9.2 За окончательный результат измерения принимают среднеарифметическое двух параллель­
ных определений, если выполняется условие приемлемости:
[(2|С 1- С 2 |)/(С1 + С2)] • 100 < готн, (2)
где С1 и С2 — результаты параллельных определений массовой доли животного (свиного, говяжьего,
бараньего) белка, определенные по градуировочному графику, %;
готн — предел повторяемости, приведенный в таблице 1.
Результат вычислений округляют до целого числа.
10 Требования безопасности
10.1 При подготовке и проведении измерений необходимо соблюдать требования техники безо­
пасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007.
4

ГОСТ 31477—2012
10.2 Помещение, в котором проводят измерения, должно быть снабжено приточно-вытяжной вен­
тиляцией. Работу необходимо проводить, соблюдая правила личной гигиены и противопожарной безо­
пасности в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.004, и иметь средства пожаротушения по
ГОСТ 12.4.009.
10.3 При работе с электроприборами необходимо соблюдать требования безопасности по
ГОСТ 12.1.019.
5

ГО С Т 31477— 2012
Б иблиограф ия
[1] ИСО 17604:2003 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Отбор пробе туши для микробио­
логического анализа
6

ГОСТ 31477— 2012
УДК 637.5.045:633.34:537.3:006.354 МКС 67.120.10
Ключевые слова: стандарт, мясо, мясные продукты, иммунопреципитационный метод, животный белок,
свиной белок, говяжий белок, бараний белок, соевый изолят, преципитирующая сыворотка, диагности­
ческая сыворотка
7

Редактор Н.В. Таланова
Технический редактор Н.С. Гоишанова
Корректор Р.А. Ментова
Компьютерная верстка В.И. Гоищенко
Сдано в набор 25.10.2012. Подписано в печать 24.12.2012. Формат 60х841/8. Гарнитура Ариал. Уел. печ. л. 1,40.
Уч.-изд. л. 0,70. Тираж 150 экз. Зак. 1160.
ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ», 123995 Москва, Гранатный пер., 4.
www.gostinfo.ru info@gostinfo.ru
Набрано во ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ» на ПЭВМ.
Отпечатано в филиале ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ» — тип. «Московский печатник», 105062 Москва, Лялин пер., 6.
ÃÎÑÒ 31477-2012