ГОСТ 32113-2013 Продукция алкогольная и сырье для ее производства. Ферментативный метод определения массовой концентрации лимонной кислоты

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ
(МГС)
INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION, METROLOGY AND CERTIFICATION
(ISC)
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ
СТАНДАРТ
ГОСТ
32113-
2013
ПРОДУКЦИЯ ВИНОДЕЛЬЧЕСКАЯ
Метод определения массовой концентрации
лимонной кислоты
Издание официальное
Москва
Стандартинформ
2013
âîëîãîäñêèå êðóæåâà ïðåçåíòàöèÿ

ГОСТ 32113—2013
Предисловие
Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандар­
тизации установлены ГОСТ 1.0—92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положе­
ния» и ГОСТ 1.2—2009 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты
межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила раз­
работки, принятия, применения, обновления и отмены»
Сведения о стандарте
1 ПОДГОТОВЛЕН Государственным научным учреждением «Всероссийский научно-исследова­
тельский институт пивоваренной, безалкогольной и винодельческой промышленности» Российской ака­
демии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИПБиВП Россельхозакадемии)
2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии
(Росстандарт)
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (про­
токол от 25 марта 2013 г. № 55-П)
За принятие проголосовали:
Краткое наименование страны
по МК(ИСО 3166)004—97
Код страны
по МК (ИСО 3166) 004—97
Сокращенное наименование национального органа
по стандартизации
Армения AM М инэкономики Республики Арм ения
Беларусь BY Госстандарт Республики Б еларусь
Киргизия KG Кыргызстандарт
Молдова MD М олдова-С тандарт
Россия RU Росстандарт
Таджикистан TJ Т адж икстандарт
Узбекистан u z Узстандарт
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 5 июня
2013 г. № 145-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 32113—2013 введен в действие в качестве нацио­
нального стандарта Российской Федерации с 1 января 2014 г.
5 Настоящий стандарт подготовлен на основе применения ГОСТ Р 52391—2005
6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информацион­
ном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячном инфор­
мационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены
настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном
информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уве­
домление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования— на офи­
циальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети
Интернет
©Стандартинформ, 2013
В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизве­
ден, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального
агентства по техническому регулированию и метрологии

ГОСТ 32113—2013
Содержание
1 Область применения............................................................................................................................................. 1
2 Нормативные с с ы л к и .......................................................................................................................................... 1
3 Требования безопасности..................................................................................................................................2
4 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда, реактивы и материалы
........................2
5 Отбор пр о б ..............................................................................................................................................................3
6 Подготовка к выполнению изм ерений.............................................................................................................. 3
6.1 Условия выполнения и зм ер ен и й .............................................................................................................. 3
6.2 Подготовка и отбор кювет............................................................................................................................ 3
6.3 Приготовление рабочих растворов............................................................................................................3
6.4 Подготовка п р и б о р о в ..................................................................................................................................4
7 Выполнение измерений....................................................................................................................................... 4
7.1 Подготовка п р о б ы ....................................................................................................................................... 4
7.2 Измерение оптической плотности.............................................................................................................. 5
8 Обработка результатов измерений.................................................................................................................... 5
9 Контроль точности результатов..........................................................................................................................6
9.1 Контроль повторяемости (сходим ости)................................................................................................... 6
9.2 Контроль воспроизводимости.................................................................................................................... 6
9.3 Контроль погрешности..................................................................................................................................6
III

ГОСТ 32113—2013
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
ПРОДУКЦИЯ ВИНОДЕЛЬЧЕСКАЯ
Метод определения массовой концентрации лимонной кислоты
W ine production.
M ethod fo r determ ination o f citric acid m ass concentration
Дата введения — 2014—01—01
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на винодельческую продукцию и устанавливает метод
определения массовой концентрации лимонной кислоты в диапазоне от 3 до 2000 мг/дм3.
Метод основан на спектрофотометрическом/фотометрическом определении количества окислен­
ного входе ферментативных реакций никотинамид-адениндинукпеотида (НАД+), эквивалентного мас­
совой концентрации лимонной кислоты.
Оптическую плотность измеряют в кювете номинальной толщиной 10 мм при длине волны
1= 340 нм (максимум поглощения NADH) либо 334 или 365 нм — при использовании фотометра с преры­
вистым спектром.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ 12.1.004—91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие
требования
ГОСТ 12.2.007.0—75 Система стандартов безопасности труда. Изделия электротехнические.
Общие требования безопасности
ГОСТ 12.4.009—83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объ­
ектов. Основные виды. Размещение и обслуживание
ГОСТ 12.4.103—83 Система стандартов безопасности труда. Одежда специальная защитная,
средства индивидуальной защиты ног и рук. Классификация
ГОСТ 908—2004 Кислота лимонная моногидрат пищевая. Технические условия
ГОСТ 1770—74 (И С 0 1042—83, ИСО 4788—80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилин­
дры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 3769—78 Реактивы. Аммоний сернокислый. Технические условия
ГОСТ 4201—79 Реактивы. Натрий углекислый кислый. Технические условия
ГОСТ 4328—77 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия
ГОСТ 4517—87 Реактивы. Методы приготовления вспомогательных реактивов и растворов, при­
меняемых при анализе
ГОСТ 4529—78 Реактивы. Цинкхлористый. Технические условия
ГОСТ ИСО 5725-6—2003 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов изме­
рений. Часть 6. Использование значений точности на практике
ГОСТ 6709—72 Вода дистиллированная. Технические условия
ГОСТ 12026—76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия
ГОСТ 17299—78 Спирт этиловый технический. Технические условия
ГОСТ 24104—2001 Весы лабораторные. Общие технические требования
Издание официальное
1

ГОСТ 32113—2013
ГОСТ 25336— 82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры
и размеры
ГОСТ 28498— 90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы
испытаний
ГОСТ 29169— 91 (И С 0 6 4 8 — 77) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной отметкой
ГОСТ 29227— 91 (ИСО 835-1— 81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные.
Часть 1. Общие требования
ГОСТ 31730— 2012 Продукция винодельческая. Правила приемки и методы отбора проб
Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылоч­
ных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального
агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информа­
ционному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и
по соответствующим выпускам ежемесячно издаваемого информационного указателя за текущий год. Если ссы­
лочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заме­
няющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана
ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
3 Требования безопасности
3.1 Требования электробезопасности при работе с приборами — по ГО С Т 12.2.007.0.
3.2 Помещ ение лаборатории долж но соответствовать требованиям пожарной безопасности по
ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГО С Т 12.4.009.
3.3 При выполнении анализов необходимо выполнять требования безопасности при работе с
химическими реактивами согласно ГОСТ 12.4.103.
4 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда,
реактивы и материалы
Спектроф отометр, позволяющ ий проводить измерения при длине волны 340 нм, шириной полосы
пропускания не более 5 нм; основная погреш ность измерения коэф фициента светопропускания не
бо л е е +0,1 %; кварцевые или стеклянные кюветы номинальной толщ иной 10 мм. При отсутствии спектро­
фотометра можно пользоваться ф отометром с прерывистым спектром, позволяющ им проводить изме­
рения при длине волны А, равной 334 нм или 365 нм.
Весы лабораторные по ГОСТ 24104 с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократ­
ного взвешивания + 0,05 мг.
pH-метр с диапазоном измерения от 1 до 10 е д . pH; погрешность измерения— не более ±0,05 ед. pH.
Секундомер с диапазоном измерения от 60 с до 30 мин; погрешность измерения — не более
+ 0,5 мин.
Пипетки по ГОСТ 29169 вместимостью 1,2, 5 ,1 0 и 25 см3, 1 -го или 2-го класса.
Пипетки по ГОСТ 29227 вместимостью от 0,5 до 2 см3, 1 -го или 2-го класса.
М икропипетки вместимостью 5— 5 0 ,1 0 0 — 1000 мкп.
Колбы мерные по ГОСТ 1770 вместимостью 100,500 см3,1 -го или 2-го класса.
Терм ом етрж идкостны й стеклянный по ГОСТ 28498 с диапазоном измерения от 10 °С до 50 С, цена
деления 1 С.
Г игрометр психрометрический.
Колба коническая по ГОСТ 25336 вместимостью 50 см3.
Воронка химическая по ГОСТ 25336.
Стаканы химические по ГОСТ 25336 вместимостью 10 и 25 см3.
Цилиндры по ГОСТ 1770 вместимостью 5 0 ,1 0 0 ,2 5 0 см3.
Палочка стеклянная или пластмассовая.
Натрия гидроокись по ГОСТ 4328, х. ч.
Кислота лимонная пищевая по ГОСТ 908, экстра.
Глицилглицин.
Ц инкхлористы й по ГОСТ 4529, х. ч.
Н икотинамид-аденин-динукпеотид.
М алат-дегидрогеназа (МДГГ), раствор массовой концентрацией 5 мг/см3, активность 136 U (ЕС
1.1.1.37).
2

ГОСТ 32113—2013
Лактат-дегидрогеназа (ЛДГГ), раствор массовой концентрацией 5 мг/см3, активность 280 U (ЕС
1.1.1.27).
Цитрат-лиаза (ЦЛ), раствор массовой концентрацией 5 мг/см3, активность 12 U (ЕС 4.1.3.6).
Аммоний сернокислый по ГОСТ 3769, х. ч.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Вода бидистиллированная по ГОСТ 4517.
Натрий углекислый кислый по ГОСТ 4201, х. ч.
Поливинилполипирролидон.
Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.
Спирт этиловый технический по ГОСТ 17299.
Допускается применение средств измерений, вспомогательного оборудования с аналогичными
метрологическими и техническими характеристиками, а также реактивов по качеству не хуже вышеука­
занных.
5 Отбор проб
Отбор проб — по ГОСТ 31730.
6 Подготовка к выполнению измерений
6.1 Условия выполнения измерений
При выполнении измерений необходимо соблюдать следующие условия:
- температура окружающей с р е д ы ..............................................................................от 20 С до 30 °С;
- относительная влажность воздуха, не б о л е е ..............................................................................90 %;
- атмосферное д авление............................................................................................ 630— 800 мм рт. ст.
6.2 Подготовка и отбор кювет
Кюветы, предназначенные для определения, моют 10 %-ным раствором соляной кислоты; затем
трижды промывают дистиллированной водой и один раз этиловым спиртом. Не допускаются примене­
ние растворов щелочей, концентрированных кислот и механическая чистка кювет с помощью абразив­
ных средств. Затем кюветы высушивают на фильтровальной бумаге под стеклянным стаканом при
комнатной температуре.
Выполняют три параллельных измерения оптической плотности на спектрофотометре/фотометре
при длине волны 340 нм (334 нм или 365 нм). Для выполнения измерения используют только те кюветы,
для которых выполняется условие AKi <0,005.
Для выполнения измерений на однокюветныхспектрофотометрах/фотометрах используют одну и
туже кювету.
6.3 Приготовление рабочих растворов
6.3.1 Приготовление раствора хлористого цинка (ZnCI2) массовой концентрацией
80 мг/100 см3
В мерную колбу вместимостью 100 см3 переносят 80 мгхлористого цинка, добавляют 10 см3 бидис-
тиллированной воды, перемешивают до полного растворения. Затем объем доводят до метки бидистил-
лированной водой.
6.3.2 Приготовление раствора натрия гидроокиси молярной концентрацией c(NaOH) =
= 5 моль/дм3
В мерную колбу вместимостью 500 см3 наливают 200— 250 см3 бидистиллированной воды. Затем
постепенно, не допуская разогрева свыше 50 С, вносят 100 г натрия гидроокиси. Закрывают колбу
пробкой и перемешивают круговыми движениями до полного растворения щелочи. Раствор охлаждают
до температуры 20 С — 25 С, доводят до метки бидистиллированной водой и тщательно
перемешивают.
Срок хранения раствора при комнатной температуре — не более 3 мес.
6.3.3 Приготовление раствора сернокислого аммония молярной концентрацией с
[(N H ^SO J = 3,2 моль/дм3
В мерную колбу вместимостью 100 см3 переносят 42,28 г сернокислого аммония, добавляют 60 см3
бидистиллированной воды и перемешивают круговыми вращениями. Затем объем доводят до метки
бидистиллированной водой.
Срок хранения раствора при комнатной температуре — не более 3 мес.
3

ГОСТ 32113—2013
6.3.4 Приготовление буферного раствора с pH = 7,8 ед. pH
В мерную колбу вместимостью 500 см3 переносят 7,13 г глицилглицина, добавляют 70 см3 бидис-
тиллированной воды и перемешивают. Затем добавляют 13 см3 раствора натрия гидроокиси молярной
концентрацией 5 моль/дм3, приготовленного по 6.3.2,10 см3 раствора хлористого цинка, приготовленно­
го по 6.3.1, и доводят объем до метки бидистиллированной водой.
Срокхранения раствора при температуре 4 С — не более четырех недель. Еженедельно проверя­
ют значение pH.
6.3.5 Приготовление раствора восстановленного никотинамид-аденин-динуклеотида
молярной концентрацией с (NADH) = 6-10_3моль/дм3
В стакан вместимостью 25 см3 вносят 30 мг NADH, растворяют в 6 см3 бидистиллированной воды.
Затем добавляют 60 мг углекислого кислого натрия и перемешивают.
6.3.6 Приготовление раствора малат-дегидрогеназы/лактат-дегидрогеназы (МДГГ/ЛДГГ)
В стакан вместимостью 10 см3 вносят микропипеткой 1 см3 раствора МДГГ массовой концентраци­
ей 5 мг/см3, 0,4 см3 раствора сернокислого аммония молярной концентрацией 3,2 моль/дм3 (приготов­
ленного по 6.3.3), 0,5 см3 раствора ЛДГГ массовой концентрацией ферментного препарата 5 мг/см3 и
перемешивают.
Срокхранения раствора при температуре минус 20 С — не более четырех недель.
6.3.7 Приготовление раствора цитрат-лиазы молярной концентрацией с (ЦП) = 5 мг/см3
В стакан вместимостью 10 см3 вносят 168 мг ЦП. Затем добавляют 1 см3 ледяной бидистиллиро­
ванной воды и перемешивают.
Срокхранения раствора при температуре минус 20 С — не более четырех недель.
6.3.8 Приготовление суспензии поливинилполипирролидона (ПВПП)
В стакан вместимостью 25 см3 переносят 0,2 г ПВПП, добавляют 10— 15 см3 дистиллированной
воды и перемешивают. Затем отстаивают в течение 15 мин и фильтруют через складчатый фильтр. Оса­
док, оставшийся на фильтре, используют для обесцвечивания красных вин.
Примечание — В м есто п р и готов л е н и я р а б о ч и х ра ство р о в по 6 .3 .1 — 6 .3 .7 д оп у с ка е тс я и с п о л ь зо в а н и е
готов ы х и м п о р тн ы х р а ств о р о в по ка ч е ств у не хуж е п р е д усм о тр е н н ы х по 6.3 .1 — 6.3.7.
6.4 Подготовка приборов
Подготовку спектрофотометра/фотометра и pH-метра к измерениям осуществляют в соответ­
ствии с руководствами по эксплуатации этих приборов.
Нулевое показание по шкале оптической плотности устанавливают по воздуху.
7 Выполнение измерений
7.1 Подготовка пробы
7.1.1 Удаление двуокиси углерода, содержащейся в вине и винном коктейле
Избыток двуокиси углерода удаляют в соответствии с порядком, установленным нормативными
документами, действующими на территории государств, принявших стандарт.
7.1.2 Обесцвечивание красного вина
При анализе интенсивно окрашенных красных вин проводят обесцвечивание пробы. К 10 см3 вина,
помещенного в коническую колбу вместимостью 50 см3, добавляют ПВПП, приготовленный по 6.3.8,
смесь перемешивают в течение 2— 3 мин, а затем фильтруют через складчатый бумажный фильтр. Для
измерения используют прозрачный или слегка окрашенный фильтрат.
7.1.3 Разбавление пробы
В зависимости от проведенной оценки значения массовой концентрации лимонной кислоты пробу
разбавляют дистиллированной водой в соответствии с таблицей 1.
Таблица 1
Диапазон измерений массовой концентрации лимонной кислоты, мг/дм3 Коэффициент разбавления К
О т 3 д о 2 40 вклю ч. 1
Св. 240 » 850 » 4
» 850 »1250 » 5
» 1250 »2000 » 10
4

ГОСТ 32113—2013
7.2 Измерение оптической плотности
В кюветы с помощью пипетки и микропипетки дозируют растворы реактивов и пробу в количествах
и в порядке, указанном в таблице 2.
Таблица 2
Наименование растворов
Объем, см3
Контрольный раствор (А1К) Испытуемый раствор (А1пр)
Б уф ерны й р а створ по 6.3.4 1,00 1,00
Р аствор N AD H по 6.3.5 0,10 0,10
П роба — 0,20
Б ид и сти л л и р о ва нн а я вода 2,00 1,80
Р аствор М ДГГ/Л ДГГ по 6.3.6 0,02 0,02
Растворы в кювете осторожно перемешивают стеклянной или пластмассовой палочкой и выдержи­
вают в течение (5,0 ±0,5) мин.
Проводят измерение оптической плотности относительно воздуха контрольного (А1К) и испытуе­
мого (А1ПР) растворов с записью результата измерения до третьего знака после запятой.
Затем в растворы добавляют по 0,02 см3 раствора цитрат-лиазы, приготовленного по 6.3.7, пере­
мешивают и выдерживают в течение (5,0 ± 0,5) мин. Повторно проводят измерение оптической плотнос­
ти относительно воздуха контрольного (А2к) и испытуемого (Л2Пр) растворов с записью результата
измерения до третьего десятичного знака.
8 Обработка результатов измерений
8.1 Массовую концентрацию лимонной кислоты С, мг/дм3, вычисляют по формуле
С = аААК, (1)
где а = 488 мг/дм3 для измерений приХ= 334 нм;
а = 479 мг/дм3 для измерений приХ= 340 нм;
а = 887 мг/дм3 для измерений приХ= 365 нм;
ДА — разность оптических плотностей, вычисленная по формуле (2);
К— коэффициент разбавления по 7.1.3.
8.2 Разность значений оптических плотностей вычисляют по формуле
^ “ И1ПР- ^2П р)- И ж - ^2к)’ (2)
где А 1ПР и А2пр — значения оптической плотности испытуемого раствора до и после реакции с цит-
рат-лиазой по 7.2;
/Ц к и А2К— значения оптической плотности контрольного раствора до и после реакции с цитрат-
лиазой по 7.2.
Примечание — Е сли ( А 1К - А 2 |<) и м е е т о тр и ц а те л ь н о е зн а ч е н и е , то его су м м и р у ю т с ( А 1ПР - А 2 пр ).
О п р ед е л е н н а я по ф о р м ул е (2) р а зн о сть зн а ч е н и й о п ти ч е с ки х п л о тн о сте й ДА, ка к правил о, с о с та в л я е т не м енее
0 ,100 и не б о л е е 0,800. В п р о тивн ом с л уч ае и зм е н я ю т ко э ф ф и ц и е н т р а зб а в л е н и я по 7.1.3.
Вычисления проводят до первого десятичного знака.
За результат анализа принимают среднеарифметическое значение двух результатов параллель­
ных определений, округленное до целогочисла, абсолютное расхождение между которыми не превыша­
ет предела повторяемости (сходимости) г.
Значения предела повторяемости (сходимости) г приведены в таблице 4. Результаты измерений
считают приемлемыми при условии
(3)I Xi-X2<r,
5

ГОСТ 32113—2013
гррХ^,Х2 — массовая концентрация лимонной кислоты в двух параллельных определениях.
Если условие (3) не выполняется, то проводят повторные измерения и проверку приемлемости
результатов измерений, полученных в условиях повторяемости (сходимости) в соответствии с
ГОСТ ИСО 5725-6 (пункт 5.2.2).
9 Контроль точности результатов
9.1 Контроль повторяемости (сходимости)
При контроле повторяемости (сходимости) абсолютное значение разности двух результатов
параллельных определений, полученных в условиях повторяемости (на одной и той же пробе, водной и
той же лаборатории, одним и тем же оператором, с использованием одного и того же оборудования, в
пределах короткого промежутка времени), не должно превышать абсолютного предела повторяемости
(сходимости) г, т. е. с вероятностью Р = 0,95 должно выполняться условие (3).
9.2 Контроль воспроизводимости
П ри контроле воспроизводимости абсолютное значение разности двух результатов анализа одной
и той же пробы, полученных в условиях воспроизводимости (в двух лабораториях, разными оператора­
ми, с использованием различного оборудования), не должно превышать предела воспроизводимости R.
Значения R приведены в таблице 4. Результаты измерений считают приемлемыми при условии
| X l - X 2|< R . (4)
9.3 Контроль погрешности
При проведении контроля погрешности метода используют стандартный раствор лимонной кисло­
ты лабораторного приготовления. Схема дозирования представлена в таблице 3.
Таблица 3
Наименование раствора
Объем, см3
Контрольный
раствор
Испытуемый
раствор
Стандартный
раствор
Стандартный
раствор +
испытуемый раствор
Б уф ерны й раствор по 6.3.4 1,00 1,00 1,00 1,00
Р аствор N AD H по 6.3.5 0,10 0,10 0,10 0,10
Проба — 0,20 — 0,10
С танд артны й раствор — — 0,20 0,10
Б и д истил л ированн ая вода 2,00 1,80 1,80 1,80
Р аствор М ДГГ/Л ДГГ по 6.3.6 0,02 0,02 0,02 0,02
Растворы в кюветах осторожно перемешивают стеклянной или пластмассовой палочкой и выдер­
живают в течение (5,0 + 0,5) мин. Проводят измерение оптической плотности /Ц (для контрольного,
испытуемого, стандартного и стандартного + испытуемого растворов). Далее процедуру анализа про­
должают в соответствии с 7.2.
Разность значений оптических плотностей вычисляют по формуле (2) и формулам
^ п р + станд — ( ^ 1 ПР + станд — ^ 2 П Р + станд) — ( ^ 1 К — ^ 2 к ) ’ (®)
^ с т а н д - (^1станд — ^2 станд ) — ( ^ 1 К — ^ 2 к ) - (®)
Вычисляют степень повторного нахождения стандарта, %, по формуле
ПН = 2А'^1Р+станд ~ АА 10о. (7)
ААтганд
Степень повторного нахождения должна находиться в интервале:
95 % < Ш < 1 0 0 %.
6

ГОСТ 32113—2013
Диапазоны измерения массовых концентрацией лимонной кислоты и значения показателей точ­
ности метода измерений при Р = 0,95 приведены в таблице 4.
Таблица 4
Диапазон измерений
концентраций лимонной
кислоты, мг/дм3
Предел повторяемости
(сходимости) г, мг/дм3
Предел воспроизводимости
R, мг/дм3
Границы относительной
погрешности ± 5, %
От 3 до 400 включ. 14 39 5
Св. 400 » 2000 » 32 65 4,5
7

ГОСТ 32113—2013
УДК 663.5.001.4:006.354 МКС 67.160.10 Н79
Ключевые слова: винодельческая продукция, лимонная кислота, ферментативные реакции, спектрофо­
тометрический метод, фотометрический метод, требования безопасности, выполнение измерений, об­
работка результатов, контроль точности результатов
Сдано в набор 11
Редактор М.Е. Никулина
Технический редактор В.Н. Прусакова
Корректор Е.Д. Дульнева
Компьютерная верстка А.Н. Золотаревой
.11.2013. Подписано в печать 24.12.2013. Формат 6 0 x 8 4 ^ . Гарнитура Ариал.
Уел. печ. л. 1,40. Уч.-изд. л. 0,95. Тираж 123 экз. Зак. 1512.
ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ», 123995 Москва, Гранатный пер., 4.
www.gostinfo.ru info@gostinfo.ru
Набрано во ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ» на ПЭВМ.
Отпечатано в филиале ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ» — тип. «Московский печатник», 105062 Москва, Лялин пер., 6.

Изменение № 1 ГОСТ 32113—2013 Продукция винодельческая. Метод определения массовой кон­
центрации лимонной кислоты
Принято Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (прото­
кол № 47—2015 от 18.06.2015)
Зарегистрировано Бюро по стандартам МГС № 11113
За принятие изменения проголосовали национальные органы по стандартизации следующих госу­
дарств: AM, KG, КZ [коды альфа-2 по МК (ИСО 3166) 004]
Дату введения в действие настоящего изменения устанавливают указанные национальные
органы по стандартизации*
Наименование стандарта изложить в новой редакции:
«Продукция алкогольная и сырье для ее производства. Ферментативный метод определения массо­
вой концентрации лимонной кислоты
Alcoholic products and raw materials for their production. Enzymatic method for determination of citric acid
mass fraction».
Раздел 1 изложить в новой редакции:
«1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на вина, виноматериалы, игристые вина (шампанское), вин­
ные напитки и сырье для их производства (далее — продукт) и устанавливает ферментативный метод
определения массовой концентрации лимонной кислоты в указанных продуктах. Диапазон измерений — от
0,01 до 2,00 г/дм3».
Раздел 2 дополнить ссылками:
«ГОСТ OIML R 76-1—2011 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавто­
матического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания
ГОСТ 3118— 77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия
ГОСТ 5962—2013 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия
ГОСТ 32095—2013 Продукция алкогольная и сырье для ее производства. Метод определения объем­
ной доли этилового спирта»;
ссылку на ГОСТ ИСО 5725-6—2003 дополнить знаком сноски: *;
дополнить сноской — *;
«* На территории Российской Ф ед ерац ии д ей ств уе т ГО С Т Р И СО 5725-6— 2002 «Т очность (пра в и л ьно сть и
п р еци зионность) м етодов и результатов изм ерений. Ч асть 6. И спол ьзовани е знач ений точности на практике»;
исключить ссылки:
«ГОСТ 17299— 78 Спирт этиловый технический. Технические условия
ГОСТ 24104—2001 Весы лабораторные. Общие технические условия».
Раздел 4. Первый, второй абзацы изложить в новой редакции:
«Спектрофотометр с шириной спектральной полосы не более 10 нм для измерений при длинах волн
334, или 340, или 365 нм, с пределами допускаемых значений абсолютной погрешности при измерении
коэффициента пропускания ± 1 % (кюветы из оптического стекла или полимерных материалов с толщиной
поглощающего свет слоя 1 см).
Весы неавтоматического действия по ГОСТ OIML R 76-1 с пределами допускаемой абсолютной по­
грешности ± 0,001 г.»;
пятый, шестой абзацы изложить в новой редакции:
«Пипетки с одной меткой 1-2-1, 1-1-1, 1-2-2, 1-1-2, 1-2-5, 1-1-5, 1-2-10, 1-1-10, 1-2-25, 1-1-25 по
ГОСТ 29169.
Пипетки градуированные 1-1-1-0,5; 1-1-2-0,5; 2-1-1-0,5; 2-1-2-0.5; 2-1-1-0,5; 1-1-1-1; 1-1-2-1;2-1-1-1;2-1-
2-1;2-1-1-1; 1-1-1-2; 1-1-2-2; 2-1-1-2; 2-1-2-2; 2-1-1-2; 1-1-1-5; 1-1-2-5; 2-1-1-5; 2-1-2-5; 2-1-1-5 по ГОСТ 29227.»;
восьмой абзац изложить в новой редакции:
«Колбы мерные 1-100-2,2-100-2,3-100-2,1-500-2,2-500-2,3-500-2 по ГОСТ 1770.»;
одиннадцатый — четырнадцатый абзацы изложить в новой редакции:
«Колбы Кн-1-50, Кн-2-50 по ГОСТ 25336.
* Д ата введ ения в д ей стви е на территории Р оссийской Ф ед ерац ии — 2016— 01— 01.
1

(Продолжение Изменения № 1 к ГОСТ32113 —2013)
Воронка В-56-80 ХС по ГОСТ 25336.
Стаканы В-1-10 ТС, Н-1-10ТС, В-1-25 ТС, Н-1-25ТС по ГОСТ 25336.
Цилиндры 1-50-2,1-100-2,1-250-2 по ГОСТ 1770.»;
восемнадцатый абзац изложить в новой редакции:
«глицилглицин, препарат массовой долей не менее 99 % основного вещества»;
двадцатый— двадцать третий абзацы изложить в новой редакции:
«Никотинамидадениндинуклеотид восстановленный (НАДН), препарат массовой долей основного
вещества не менее 90 %.
L-малатдегидрогеназа (L-МДГ), ферментативная активность не менее 136 Е (ЕС 1.1.1.37).
L-лактатдегидрогеназа (L-ЛДГ), ферментативная активность не менее 280 Е (ЕС 1.1.1.27).
Цитратлиаза (ЦП), ферментативная активность не менее 12 Е (ЕС 4.1.3.6).»;
двадцать восьмой абзац изложить в новой редакции:
«Поливинилполипирролидон (ПВПП)»;
предпоследний, последний абзацы изложить в новой редакции:
«Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья по ГОСТ 5962.
Кислота соляная по ГОСТ 3118, х.ч.»;
дополнить абзацем (после последнего):
«Допускается применение средств измерений, вспомогательного оборудования с аналогичными мет­
рологическими и техническими характеристиками, а также посуды, реактивов и материалов, по качеству не
хуже вышеуказанных».
Подраздел 6.2. Первый абзац после слов «соляной кислоты» дополнить словами: «приготовленной
по ГОСТ 4517»;
второй, третий абзацы исключить.
Пункт 6.3.1 дополнить абзацем:
«Срокхранения раствора при комнатной температуре — не более 1 мес».
Пункт 6.3.5. Наименование изложить в новой редакции:
«Приготовление раствора никотинамидадениндинуклеотида восстановленного»;
первый абзац. Заменить обозначение: «NADH» на «НАДН».
Пункт 6.3.6. Наименование изложить в новой редакции:
«Приготовление раствора Ьмалатдегидрогеназы/Ьлактатдегидрогеназы»;
первый абзац. Заменить обозначения: «МДГГ» на « L-МДГ», «ЛДГГ» на «L-ЛДГ».
Пункт 6.3.7. Наименование изложить в новой редакции:
«Приготовление раствора цитратлиазы»;
первый абзац. Заменить значение: «168 мг» на «50 мг».
Пункт 6.3.8 изложить в новой редакции:
«6.3.8 Приготовление контрольного раствора лимонной кислоты
В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят от 0,200 до 0,500 г лимонной кислоты и доводят до
метки раствором этилового ректификованного спирта объемной долей 10 %.
Срок хранения раствора при комнатной температуре — не более 6 мес».
Пункт 6.4. Первый абзац. Исключить слово: «/фотометра».
Пункты 7.1.1,7.1.2 изложить в новой редакции:
«7.1.1 Удаление диоксида углерода (двуокиси углерода)
Пробы продуктов, насыщенных диоксидом углерода, предварительно дегазируют. Избыток диокси­
да углерода удаляют в соответствии с ГОСТ 32095 (пункт 6.1).
7.1.2 Обесцвечивание интенсивно окрашенных проб продуктов
Интенсивно окрашенные красные пробы продуктов предварительно подвергают обесцвечиванию с
помощью ПВПП.
В стакан вместимостью 25 см3 вносят 0,2 г ПВПП, добавляют 10— 15 см3 дистиллированной воды и
перемешивают. Затем отстаивают в течение 15 мин и фильтруют через бумажный складчатый фильтр из
фильтровальной бумаги по ГОСТ 12026. Осадок, оставшийся на фильтре, переносят в коническую колбу
вместимостью 50 см3, добавляют 10 см3 пробы продукта, перемешивают в течение двух-трех минут, а
затем фильтруют через бумажный складчатый фильтр из фильтровальной бумаги по ГОСТ 12026. Полу­
ченный обесцвеченный фильтрат используют для дальнейших определений».
2

(Продолжение Изменения № 1 к ГО СТ32113 —2013)
Пункт 7.1.3. Таблицу 1 изложить в новой редакции:
Таблица 1
Диапазон измерений массовой Коэффициент разбавления
концентрации лимонной кислоты, г/дм3 К
О т 0,01 д о 0,24 вклю ч. 1
Св. 0,24 » 0,85 » 4
» 0,85 » 1,25 » 5
» 1,25 » 2 ,0 0 » 10
Пункт 7.2. Таблица 2. Заменить обозначения и слово: «Л» на «О», «NADH» на «НАДН», «МДГГ/ЛДГГ»
на «1_-МДГ71_-ЛДГ», «Контрольный» на «Холостой»;
предпоследний, последний абзацы. Заменить обозначение: «А» на «D»;
последний абзац после слов «в растворы» дополнить словами: «находящиеся в кюветах,».
Подразделы 8.1,8.2 изложить в новой редакции:
«8.1 Массовую концентрацию лимонной кислоты С, г/дм3, вычисляют по формуле
М Vr F AD
£■£/■ -1000 ’
(1)
где М — молярная масса лимонной кислоты, равная 192,1 г/моль;
Vi — общий объем раствора в кювете, равный 3,12 см3 (см. таблицу 2);
F — коэффициент предварительного разбавления пробы;
AD — разность значений оптических плотностей, вычисляемая по формуле
ДD - (О щ р ^ г п р ) (£>1Х ^2х)> (2 )
гдеО1п р и02пр — значения оптической плотности раствора с пробой продукта дои после добавления
раствора МДГГ/ЛДГГ (см. 6.3.6);
D ix и D2X — значения оптической плотности холостой пробы до и после добавления раствора
1_-МДГГ/1_-ДГГ (см. 6.3.6);
е — молярный коэффициент поглощения НАДН, (дм3 • ммоль-1 • см-1):
- при 340 нм — 6,30;
- при 365 нм — 3,40;
- при 334 нм — 6,18;
d — толщина поглощающего свет слоя кюветы, равная 1 см;
V2 — объем пробы продукта, равный 0,20 см3 (см. таблицу 2);
1000 — коэффициент пересчета ммоль в моль.
П рим ечан ие — Если (D 1X — D 2X) им еет о тр и ц а те л ьн о е значение, то его сум м и рую т с ( 0 1ПР — D 2np).
О пр ед е л е нна я разность знач ений оптич еских п л отностей ДО, как правило, со ста вл яе т не м енее 0,100 и не более
0,800. В противном сл уч ае изм е н я ю т ко эф ф и ц и е н т р азбавлени я по 7.1.3.
8.2 За результат определения принимают среднеарифметическое значение результатов двух парал­
лельных определений, абсолютное расхождение между которыми не превышает предела повторяемости
(сходимости) г.
Результаты измерений считают приемлемыми при условии
|С, - С2| < 0,01 г С , (3)
где С-,, С2 — результаты двух параллельных определений массовой концентрации лимонной кислоты,
г/дм3;
С — среднеарифметическое значение двух параллельных определений массовой концентрации
лимонной кислоты, г/дм3;
г — предел повторяемости (сходимости), приведенный в таблице 2а, %.
Если условие (3) не выполняется, то проводят повторные измерения и проверку приемлемости ре­
зультатов измерений, полученных в условиях повторяемости (сходимости) в соответствии с ГОСТ
ИСО 5725-6 (подраздел 4.2)».
3

(Продолжение Изменения № 1 к ГОСТ32113 —2013)
Раздел 8 дополнить подразделом 8.3:
«8.3 Результат определений в документах, предусматривающих его использование, представляют в
виде
С ± 0,01-5-С, при Р = 0,95,
где С — среднеарифметическое значение результатов л определений, признанных приемлемыми по
8.2, г/дм3;
± 5 — границы относительной погрешности измерений (см. таблицу 2а), %.
Таблица 2а
Диапазон измерений
массовой концентрации
лимонной кислоты, г/дм3
Предел
повторяемости
(сходимости) г, %,
при Р = 0,95
Предел
воспроизводимости
R, %,
при Р = 0,95
Границы относительной
погрешности
± 8, %,
при Р = 0,95
О т 0,01 д о 2,00 вклю ч. 5 7 5
Если содержание лимонной кислоты выходит за пределы границы диапазона измерений, приво­
дят следующую запись в журнале: «Массовая концентрация лимонной кислоты менее 0,01 г/дм3 (более
2,00 г/дм3)».
Пункт 9.2. Заменить слова: «анализа одной и той же пробы» на «определений в одной и той же
пробе»; «в таблице 4» на «в таблице 2а».
Пункт 9.3. Первый, второй абзацы. Заменить слово: «стандартный» на «контрольный» (3 раза);
таблицу 3 изложить в новой редакции:
Таблица 3
Наименование
раствора
Объем, см3
Контрольный
раствор
Проба Контрольный
раствор + проба
Буф ерны й раствор по 6.3.4 1,00
Р аствор НАДН по 6.3.5 0,10
П р о б а — 0,20 0,10
Контрольны й раствор 0 ,2 0 — 0,10
Б и д и сти л л и р о ва н н а я вода 1,80
Р аствор 1_-МДГ/1_-ЛДГ по
6.3.6 0,02
формулу 5 изложить в новой редакции; дополнить экспликацией:
«АОПР + конт - ( ^ш р + конт £*2пр + конт) — (Dix — ^2х) > (5)
где 0 1ПР +конт и^2пр +конт — значения оптической плотности смеси контрольного раствора с пробой
продукта до и после добавления раствора МДГГ/ЛДГГ (см. 6.3.6);
D ix и 0 2Х — значения оптической плотности холостой пробы до и после добавления
раствора 1_-МДГГ71_-ДГГ (см. 6.3.6).»;
формулу 6 изложить в новой редакции; дополнить экспликацией:
« A D Ko h t ~ (^ ш о н т ^2конт) — ( D ix — 0 2Х), (6)
где D-ik o h t и D 2ko h t — значения оптической плотности контрольного раствора до и после добавления рас­
твора МДГГ/ЛДГГ (см. 6.3.6).»;
формулу 7 изложить в новой редакции; дополнить экспликацией:
«ПН
100 (АРПР+конт ~ Д°конт)
2 ДО конт
(7)
4

(Продолжение Изменения № 1 к Г О С Т 32113 —2013)
где ADnp + конт — значение разности оптических плотностей, найденное по формуле (5);
ADK0HT — значение разности оптических плотностей, найденное по формуле (6).»;
последний абзац и таблицу 4 исключить.
Библиографические данные. Ключевые слова изложить в новой редакции:
«продукция алкогольная и сырье для ее производства, лимонная кислота, массовая концентрация,
ферментативный метод, L-малатдегидрогеназа, L-лактатдегидрогеназа, цитратлиаза, поливинилполипир-
ролидон, никотинамидадениндинуклеотид восстановленный».
(ИУС № 11 2015 г.)
5
ÃÎÑÒ 32113-2013